肝再生增强因子对大鼠肾小管上皮细胞转分化影响的研究

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1、重庆医科大学硕士研究生学位论文符号说明英文缩写英文全称0【．SML～BSACTGFDMEMECMEGFEMTFnFBSFSMHGFHRPHPN3H．TdRMyoFPAGEPVDFrALRSDSTEMEDTEMTTGF-131alpha-smoothmuscleactinbovineserulTlalbuminconnectivetissuegrowthfactorDulbecco’SmodifiedEagle‘Smediumextracellularmatrixepidermalgrowthfactorepithelialmesenchymaltransformationf

2、ibronectinfetalbovineserumfreeserummediumhepatocytegrowthfactorhorseradishperoxidashepatopoietin3Hydrogen-ThymidinemyofibroblastpolyacrylamidegelelectrophoresispolyvinylidenedifluoriderataugmenterofliverregenerationsodiumdodecylsulfateN，N，N',N'-tetramethylethylenediaminetubularepithelial--

3、myofibroblasttransdifferentiationtransforminggrowthfactor131l中文全称Ct一平滑肌肌动蛋白牛血清白蛋白结缔组织生长因子Dulbecco改良培养基细胞外基质表皮细胞生长因子上皮一间充质转分化纤连蛋白胎牛血清无血清培养基肝细胞生长因子辣根过氧化物酶肝细胞生长素3H一胸腺嘧啶核苷肌成纤维细胞聚丙烯酰胺凝胶电泳聚偏二氟乙烯大鼠肝再生增强因子十二烷基硫酸钠N，N，N’，NL四甲基乙二胺肾小管上皮一肌成纤维细胞转分化转化生长因子131重庆医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取

4、得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意．申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任．学位论文作者签名：墨菌盏日期：兰垒坌墨：生!＆学位论文作者签名：墨鹾I』基1日期：兰垒坌墨：生!＆学位论文版权使用授权书本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果

5、时署名单位为重庆医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅．学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，可以采用影印、缩印或其他手段保存论文．论文作者签名：指导教师签名：日期．拗＆牛!碧重庆医科大学硕士研究生学位论文第一部分大鼠肝再生增强因子的表达、纯化及活性测定摘要目的：利用己构建的大鼠肝再生增强因子(rALR)毕赤酵母(pichiapastoris)重组表达质粒pPIC9K-rALR，在酵母菌GSl15中诱导表达rALR，并进行纯化和体外生物学活性鉴定，为进一步研究rALR的生物学功能提供基础。方法：经PCR鉴定的

6、重组质粒pPIC9K-rALR酶切线性化后转入宿主菌GSll5中，在甲醇诱导下进行表达。表达产物rALR经超滤方法纯化后，用15％SDS-PAGE和Westernblot印迹鉴定。采用3H-TdR掺入法，观察rALR在体外对人肝癌细胞株QGY的促增殖作用以鉴定其活性。结果：目的蛋白rALR以外分泌方式在宿主菌GSI15中获得高效表达，其分子量约为15KD，与预计理论值相符合，超滤纯化得到的目的蛋白经SDS-PAGE和Westernbolt鉴定为单一条带，在体外rALR确能刺激QGY增殖，而且这种刺激作用存在着量效关系。结论：rALR在毕赤酵母菌中被高效表达和成功纯化，在体外

7、rALR确能以剂量依赖关系刺激人肝癌细胞株OGY增殖。关键词：肝再生增强因子，酵母表达，超滤纯化，活性鉴定2重庆医科大学硕士研究生学位论文第二部分rALR对大鼠肾小管上皮细胞转分化作用初步研究摘要目的：探讨重组大鼠肝再生因子(rrALR)对转化生长因子Bl(TGF-131)诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响。方法：观察细胞形态学变化，检测Q平滑肌肌动蛋白(Q—SMA)、E一钙粘蛋白(E-cadherin)和结缔组织生长因子(CTGF)蛋白及mRNA的表达水平。结果：NRK-52E细胞在加入TGF-Bl刺激培养后，细胞