大黄素对白蛋白诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响

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1、大黄素对白蛋白诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响主讲：房向东TheeffectofEmodinonthehumanrenaltubularepithelialtomesenchymaltransitioninducedbyalbumin研究背景1技术路线与方法2结果3讨论4结论5概要蛋白尿不仅仅是肾脏损伤的生物学标志，还是加速肾脏疾病向终末期肾衰进展的主要危险因素之一。研究背景肾脏损伤蛋白尿临床表现反作用物理损伤诱导化学趋化因子、炎症因子激活补体促进细胞凋亡损伤及加速纤维化机制1、正常肾单位的丢失和肾结构的破坏2、成纤维细胞及肌成纤维细胞的大量增生3、细胞外基质的产生和积聚病理变化肾脏纤维化研究

2、背景肾间质纤维化肾小球硬化肾脏纤维化肾间质纤维化是关键！间质纤维化的程度更能预测肾功能的变化！研究背景肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化（TEMT）在肾间质纤维化的发生发展中有着重要的作用，它被定义为肾小管上皮细胞丢失了上皮表型，而获得新的肌成纤维细胞特征的过程。研究背景转分化ECMECMECM上皮细胞肌成纤维细胞化学名：3-甲基-1，3，8-三羟基蒽醌大黄素传统的生物学作用：抗菌消炎、抗肿瘤、免疫抑制、保肝、护肾研究背景保护肾脏作用：清除氧自由基及炎症因子、抗细胞增殖、促细胞外基质降解、阻滞TEMT体内外研究发现大黄素可延缓糖尿病肾病、梗阻性肾病等肾脏纤维化发生，其中阻滞TEMT过程发挥重要

3、地位。研究背景研究目的白蛋白能否诱导HK-2细胞转发生转分化过程、促进细胞外基质合成大黄素对白蛋白产生的上述过程是否产生影响??技术路线与分组空白对照组大黄素对照组大黄素干预组白蛋白诱导组HK-2细胞无处理因素20μg/ml大黄素作用0、12、24、48h5mg/ml白蛋白刺激时同时加入20μg/ml大黄素作用0、12、24、48h观察各组细胞形态学变化，收集细胞总RNA半定量检测α-SMA、E-cadherin、FNmRNA的表达5mg/ml白蛋白作用0、12、24、48h各组实验重复3次，所有数据以x±s表示，行方差齐性检验，多组间计量资料采用单因素方差分析用SPSS12.0软件对数据进行

4、处理以P＜0.05为有显著性差异,P＜0.01有非常显著性差异统计方法RT-PCR正常HK-2细胞仅表达少量的α-SMA、FNmRNA，而E-cadherinmRNA的表达较强。E-cadherinα-SMAFNM0122448h大黄素对照组上述因子的表达与正常对照组无差异结果白蛋白诱导HK-2细胞表型转化及大黄素干预后的效果白蛋白可诱导HK-2细胞发生表型转化，即E-CadherinmRNA的表达下调，α-SMAmRNA的表达上调，与0h比较，12h后即有差异，48h后差异显著，p＜0.01。而同时加入20μg/ml大黄素作用后，其变化趋势明显减弱。α-SMA白蛋白诱导大黄素干预M01224

5、48h结果白蛋白诱导HK-2细胞表型转化及大黄素干预后的效果E-cadherin大黄素干预白蛋白诱导M0122448hM0122448h白蛋白诱导HK-2细胞分泌纤维连接蛋白（FN）的情况及大黄素干预后的效果FN的表达随白蛋白刺激时间延长而逐渐增多，在大黄素干预后其表达上调趋势亦明显减缓。FN白蛋白诱导大黄素干预M0122448h讨论蛋白尿与肾小管间质损伤蛋白尿的水平反映了肾小球损伤的程度MDRD试验把蛋白尿基础排出量作为独立的危险因素纳入加速慢性肾脏病进展的研究临床研究发现CKD患者在应用ACEI、ARB类药物可非依赖降压作用减少尿蛋白量的排泄而延缓慢性肾脏病恶化速度降尿蛋白和延缓GFR下降

6、之间有着紧密的联系，蛋白尿的程度对CKD预后具有很强的预测价值。讨论蛋白尿与肾小管间质损伤我们的实验结果发现，5mg/ml人纯化白蛋白刺激HK-2细胞一段时间内后，上皮细胞表型标志物E-cadherinmRNA表达下调，肌成纤维细胞表型物α-SMAmRNA表达上调，且随白蛋白作用时间的延长表达水平逐渐增强。结果表明HK-2细胞发生表型转变，介导了肾小管间质纤维化的发生。讨论TEMT与肾小管间质纤维化TEMT在肾间质纤维化的发生发展过程中发挥重要作用TEMT过程包括：肾小管上皮细胞的黏附属性缺失(E-钙粘蛋白减少)，肾小管基底膜的破坏，表达α-SMA的肌成纤维细胞增多及其向间质迁移最终导致间质纤

7、维化。。肾间质纤维化的另一决定因素是ECM合成与降解平衡的调节肌成纤维细胞分泌FN参与ECM构成。本研究选择FN作为观察ECM聚积的评价指标TEMT与肾小管间质纤维化讨论我们实验结果发现正常肾小管上皮细胞因未发生明显转分化，其FNmRNA的分泌甚微，而5mg/ml人白蛋白诱导HK-2细胞转分化的发生同时，检测到FNmRNA表达呈现时间依赖性增强，进一步参与肾间质纤维化的形成。TEMT与肾小管间质纤