活性维生素D3对白蛋白诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响

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1、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得直昌太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名(手写)：疡荡舄签字日期：力，多年z月占日I学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编

2、入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)1．、17学位论文作者签名(手写)：萨弦舄导师签名(手写)：f(勿象fZ＼

3、I签字日期：胛·j年6，月∥日签字日期：年月日摘要lIIlUlIIIIIIIIIlUIIIIIIIIlY2427716目的：探讨活性维生素D3【1，25(OH)2D3】对白蛋白诱导的正常人近端肾小管上皮细胞(

4、HK一2细胞)．问充质细胞转分化过程的影响，及TGFl31／ILK信号通路在此过程中的作用，探索1,25(OH)2D3延缓肾脏纤维化进程的可能机制。方法：体外培养的HK一2细胞随机分为以下组别：A空白对照组：未加任何刺激物；B1,25(OH)2D3诱导组[10。7mol／11,25(OH)2D3]；C白蛋白诱导组(5mg／ml白蛋白)；D10‘8mol／11,25(OH)zD3干预组[5mg／ml白蛋I刍+10垲mol／11,25(OH)2D3]；E10～mol／11,25(OH)2D3干预组【5mg／ml白蛋白+101mol／11,25(OH)2D3】；F10‘6mol／l1,25(

5、OH)2D3干预组[5mg／ml白蛋I{t+10。6mol／1l1，25(OH)2D3]；GTGFpI拮抗剂组(5mg／ml白蛋I兰l+TGFl31拮抗剂SB431542)，以上各组均培养24h。倒置显微镜下观察HK．2形态的改变；采用RT-PCR法检测细胞TGF[31、ILKmRNA的水平；细胞免疫荧光法检测细胞E．钙黏蛋白(E．cadherin)、0【一平滑肌肌动蛋白(c【一SMA)的表达水平；ELISA法检测上清液纤连蛋白(FN)的表达水平。结果：①HK．2细胞正常呈卵圆形铺路石样，白蛋白刺激后细胞胞体变长，变细，细胞问隙增大；随着1,25(OH)2D3浓度的升高，HK一2细胞形

6、态改变程度较白蛋白诱导组逐渐减轻；②白蛋白诱导组TGFl31、ILKmRNA较空白对照组显著升高(P均<0．05)，不同浓度1,25(OH)2D3干预组TGFl31、ILKmRNA明显下调(P均

7、、ILKrnRNA及仪．SMA的蛋白表达增强，E—cadherin的蛋白表达减少，诱导肾小管上皮细胞．间充质细胞转分化的发生，导致细胞外基质FN表达增加；1,25(OH)zD3呈浓度依赖性抑制白蛋白诱导的HK．2细胞转分化过程，其可能机制为1,25(OH)2D3阻断TGF[31／ILK信号通路，最终可延缓肾脏纤维化进程，从而保护肾脏。关键词：活性维生素D3；白蛋白；肾小管上皮细胞；转分化：转化生长因子-D1；整合素连接激酶ABSTRACTObjective：Tostudytheeffectof1，25一dmy出oxyvi伽niIl03【1，25(OH)2D3]onalbuminindu

8、cedepithelial-mesenchymaltransition(EMT)innormalhumanrenalproximalt11bularepithelialcells(HK一2)，andtheroleofTGFl31／ILKsignalingpathwayinthisprocess．Toexplorethepossiblemechanismsof1,25(OH)2D3delaystheprocessofrenalfibrosis．M