大鼠磨牙直接盖髓术后血管内皮生长因子和肌动蛋白的表达及意义

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1、河北医科大学硕士学位论文大鼠磨牙直接盖髓术后血管内皮生长因子和肌动蛋白的表达及意义姓名：王芹申请学位级别：硕士专业：口腔临床医学指导教师：张志勇201203中文摘要大鼠磨牙直接盖髓术后血管内皮生长因子和肌动蛋白的表达及意义摘要目的：通过建立大鼠磨牙MTA直接盖髓术后的动物模型，观察牙髓中血管内皮生长因子(VEGF)和肌动蛋白的分布规律和表达变化，进一步明确其在参与牙髓损伤修复过程中的作用机理，为临床上牙髓的保存治疗提供理论基础和实验依据。方法：由河北医科大学实验中心提供的雄性Wistar大鼠35只，体重250．2809，2．3个月，口腔卫生状况良好，无龋齿及牙周疾病。将35只Wista

2、r大鼠随机分为7组：ld、3d、5d、7d、14d、28d、正常对照组，随机选取一侧上颌第一磨牙作为实验侧。将大鼠按3ml／kg用lO％水合氯醛腹腔注射麻醉后仰卧式固定，2％碘酊消毒口腔，75％酒精棉球消毒实验侧，用装有坛球钻的高速涡轮机于牙合面近中窝向下钻磨，直至窝洞底部透出粉红色，在洞底中央用直径0．5mm的钢性锐利探针轻探暴露牙髓，生理盐水冲洗，无菌棉球轻压止血后立即将少量MTA置露髓孔处，玻璃离子水门汀充填；正常组不做处理，作为对照。分别在手术后1d、3d、5d、7d、14d、28d将动物麻醉，用4％多聚甲醛灌流固定直至四肢尾巴变得僵硬后取出磨牙区组织，修整周围牙龈及牙槽骨等软

3、硬组织，暴露出根尖，再固定48h后置10％EDTA中脱钙4w，流水冲洗过夜，去除玻璃离子充填物。常规石蜡包埋，制备硬组织切片，切片厚度为51am。随机选择经过露髓孔的切片进行HE染色及对VEGF和肌动蛋白的免疫组织化学(SP法)染色。用ImagePro．Plus软件分析VEGF和肌动蛋白的阳性细胞百分比数和染色强度并进行综合评分。用SPSS13．0统计软件进行数据分析，多组间比较采用Kruskal．WallisH检验，组间两两比较采用Wilcoxon秩和检验，按a=0．05的检验水准，P50．05为有统计学意义。结果：1VEGF表达变化正常组VEGF呈强阳性表达在血管内皮细胞中，呈弱阳

4、性或无着色表中文摘要达在成牙本质细胞和成纤维细胞中。随着盖髓时间的延长，VEGF表达强度呈先增强后降低最后接近正常水平的趋势，表达部位主要位于血管内皮细胞、成牙本质细胞、成纤维细胞中。其中3d表达开始增强，5d最强，7d、14d略有降低，至wJ28d时基本接近正常水平。七组间染色强度比较Kmskal．WallisH检验结果是：H=24．425，P0．05，认为1d和14d、28d组，正常和ld、14d、28d组

5、差异无统计学意义，染色强度无明显不同；ld*l：13d、5d、7d组比较，正常署113d、5d、7d组比较，统计学结果均为P<0．05，认为1d*113d、5d、7d组，正常和3d、5d、7d组差异有统计学意义，染色强度不同；3d*FlSd组，7d、14d、28d组比较，统计学结果均为P>0．05，认为3d矛l：lSd组，7d、14d、28d组差异无统计学意义，染色强度无明显不同；3d和7d、14d、28d组，5d与7d、14d、28d组比较统计学结果均为P<0．05，认为3d署117d、14d、28d组，5d*117d、14d、28d组差异有统计学意义，染色强度不同。2肌动蛋白表达变

6、化正常组肌动蛋白呈强阳性表达在成牙本质细胞中，呈阳性表达在血管内皮细胞中。随着盖髓时间的延长，肌动蛋白表达强度呈先降低后增强最后接近正常水平的趋势，表达部位主要位于成牙本质细胞、血管内皮细胞中。3d一些成牙本质细胞排列紊乱，肌动蛋白呈阴性表达，5d、7d随着成牙本质细胞的增多，肌动蛋白表达逐渐增强，至lJ28d肌动蛋白的表达基本恢复正常水平。七组间染色强度比较Kruskal．WallisH检验结果是：H=19．637，P

7、组比较，统计学结果均为P>0．05，认为正常和1d、5d、7d、14d、28d组，1d和5d、14d、28d组差异无统计学意义，染色强度无明显不同；正常*Dad组，ld*nad、7d组比较，统计学结果为P<0．05，认为正常,had组，ld,nad、7d组差异有统计学意义，染色强度不同；3d*nSd、7d、14d、28d组比较，统计学结果均为P<0．05，认为3d,nSd、7d、14d、28d组差异有统计学意义，染色强度不同；5d与7d组，7d