血管内皮生长因子在脑缺血耐受大鼠中的表达

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1、血管内皮生长因子在脑缺血耐受大鼠中的表达【摘要】目的检测局灶性脑缺血预处理诱导大鼠脑缺血耐受模型再灌注不同时间窗血管内皮生长因子(VEGF)的表达，探讨其在脑缺血耐受中的作用。方法将55只CAO，25只）、缺血预处理＋再缺血组（IP+MCAO，25只），后两组再随机分成5个亚组。线栓法阻塞大脑中动脉(MCAO)建立局灶性缺血预处理模型（缺血预处理10min），分别在缺血预处理后1、3、7、14、21d进行再次缺血2h再灌注22h，然后取脑检查。应用苏木精伊红染色观察脑组织病理变化并测定脑梗死体积，观察神经行为缺损,免疫组化法检测VEG

2、F蛋白表达。结果IP+MCAO组1、3、7d亚组与SS+MCAO组相应亚组比较，神经行为缺损评分明显降低,梗死体积明显减小,VEGF表达明显增高，差异均有显著性（t=2.357～11.479，P＜0.05）。结论缺血预处理诱导了脑缺血耐受，预缺血诱导的VEGF表达增加在脑缺血耐受中发挥重要作用。【关键词】血管内皮生长因子A；缺血预处理；脑缺血；大鼠　　［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatetheexpressionofvascularendothelialgroepointsafterreperfusionin

3、acerebralischemiatolerantratmodelinducedbyfocalischemiapreconditioning,andstudythesignificanceofVEGFincerebralischemiatolerance.MethodsFiftyfivehealthyCAO)group(SS+MCAO,n=25),andtheischemiapreconditioningandsubsequentMCAOgroup(IP+MCAO,n=25).Thelattertiapreconditioning,

4、theratsedMCAOentligationfor10min.Onthe1st,3rd,7th,14thand21stdayafterischemiapreconditioning,theratsatoxylinandeosin(HE)forhistologicalstudyanddeterminationofinfarctionvolume.Themodelsinedbyimmunohistochemicalstaining.Resultsparedeofcerebralinfarctioniapreconditioningind

5、ucedcerebralischemiatolerance.IPinducedupregulationofVEGFexpressionplaysanimportantroleintheinductionofischemiatolerance.［KEYCAO，25只)，预缺血10min后按不同的再灌注时间分为5个亚组，分别于再灌注1、3、7、14、21d后给予2h大脑中动脉阻塞（MCAO），再灌注22h后处死；②假手术+再缺血组(SS+MCAO，25只)，分5个亚组，假手术代替预缺血(即仅暴露颈总动脉及分叉处，不插线阻断MCA)，在假

6、手术后按前述不同时间点给予2h的MCAO，再灌注22h后处死；③假手术对照组（SS+SS，5只），两次均为假手术，即两次均仅给予暴露颈总动脉及分叉处，于第2次假手术24h后处死。　　1.2预缺血及再缺血模型制备采用由ZEALONGA等[3]改进的MCA二次线栓法。首先经左侧颈外颈内动脉插线（18.5±2.0）mm，阻断MCA，10min后将线栓退出至颈外动脉（ECA）并埋于皮下，完成缺血预处理。在规定时间点用相同方法再次MCAO，缺血2h后将线栓抽出至ECA，形成第二次再灌注，22h后处死。动物清醒后观察其行为和神经症状，以动物清醒

7、后出现右前肢不能伸展、爬行时向右侧转圈并存活至规定时间点作为造模成功的标准。各组动物术中均用白炽灯照射使其肛温维持在（37.0±0.5）℃左右，术后单笼饲养。　　1.3检测指标及方法　　1.3.1神经行为功能评分　　按MENZIES等[4]等级评分法对其神经功能进行评分：无明显功能缺损为0分；提尾时对侧前肢屈曲为1分；拉尾时对侧前肢的抓力减弱为2分；可向各方向自发运动而仅当拉尾时向对侧转圈为3分；自发向对侧转圈为4分。　　1.3.2梗死体积检测　　采用苏木精伊红（HE）染色。各组大鼠在规定时间内，用40g/L多聚甲醛行心内灌注后断头取

8、脑。将大脑沿冠状位横切为6片(厚2mm)，去除额极，将切好的脑片固定于同一固定液中4h。常规脱水，透明，浸蜡和石蜡包埋。每个蜡块切取1张切片(厚5μm)，行HE染色观察病理变化；另5张切片使用SimpleP