血管内皮生长因子在脑缺血耐受大鼠中的表达论文

《血管内皮生长因子在脑缺血耐受大鼠中的表达论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、血管内皮生长因子在脑缺血耐受大鼠中的表达论文王国峰沈娜娜王静云陈卫赵仁亮【摘要】目的检测局灶性脑缺血预处理诱导大鼠脑缺血耐受模型再灌注不同时间窗血管内皮生长因子(VEGF)的表达，探讨其在脑缺血耐受中的作用。方法将55只CAO，25只）、缺血预处理＋再缺血组（IP+MCAO，25只），后两组再随机分成5个亚组。线栓法阻塞大脑中动脉(MCAO)建立局灶性缺血预处理模型（缺血预处理10min），分别在缺血预处理后1、3、7、14、21d进行再次缺血2h再灌注22h，然后取脑检查。应用苏木精伊红染色观察脑组织病理变化

2、并测定脑梗死体积.freelepointsafterreperfusioninacerebralischemiatolerantratmodelinducedbyfocalischemiapreconditioning,andstudythesignificanceofVEGFincerebralischemiatolerance.MethodsFiftyfivehealthyCAO)group(SS+MCAO,n=25),andtheischemiapreconditioningandsubsequentM

3、CAOgroup(IP+MCAO,n=25).Thelattertiapreconditioning,theratsedMCAOentligationfor10min.Onthe1st,3rd,7th,14thand21stdayafterischemiapreconditioning,.freelatoxylinandeosin(HE)forhistologicalstudyanddeterminationofinfarctionvolume.Themodelsinedbyimmunohistochemical

4、staining.Resultsparedeofcerebralinfarctioniapreconditioninginducedcerebralischemiatolerance.IPinducedupregulationofVEGFexpressionplaysanimportantroleintheinductionofischemiatolerance.［KEYCAO，25只)，预缺血10min后按不同的再灌注时间分为5个亚组，分别于再灌注1、3、7、14、21d后给予2h大脑中动脉阻塞（MCAO）

5、，再灌注22h后处死；②假手术+再缺血组(SS+MCAO，25只)，分5个亚组，假手术代替预缺血(即仅暴露颈总动脉及分叉处，不插线阻断MCA)，在假手术后按前述不同时间点给予2h的MCAO，再灌注22h后处死；③假手术对照组（SS+SS，5只），两次均为假手术，即两次均仅给予暴露颈总动脉及分叉处，于第2次假手术24h后处死。1.2预缺血及再缺血模型制备采用由ZEALONGA等3改进的MCA二次线栓法。首先经左侧颈外颈内动脉插线（18.5±2.0）mm，阻断MCA，10min后将线栓退出至颈外动脉（ECA）并埋

6、于皮下，完成缺血预处理。在规定时间点用相同方法再次MCAO，缺血2h后将线栓抽出至ECA，形成第二次再灌注，22h后处死。动物清醒后观察其行为和神经症状，以动物清醒后出现右前肢不能伸展、爬行时向右侧转圈并存活至规定时间点作为造模成功的标准。各组动物术中均用白炽灯照射使其肛温维持在（37.0±0.5）℃左右，术后单笼饲养。1.3检测指标及方法1.3.1神经行为功能评分按MENZIES等4等级评分法对其神经功能进行评分：无明显功能缺损为0分；提尾时对侧前肢屈曲为1分；拉尾时对侧前肢的抓力减弱为2分；可向各方向自发运动

7、而仅当拉尾时向对侧转圈为3分；自发向对侧转圈为4分。1.3.2梗死体积检测采用苏木精伊红（HE）染色。各组大鼠在规定时间内，用40g/L多聚甲醛行心内灌注后断头取脑。将大脑沿冠状位横切为6片(厚2mm)，去除额极，将切好的脑片固定于同一固定液中4h。常规脱水，透明，浸蜡和石蜡包埋。每个蜡块切取1张切片(厚5μm)，行HE染色观察病理变化；另5张切片使用SimplePCI图像分析软件（美国pix公司）计算梗死体积。梗死体积百分比=(非缺血侧体积－缺血侧正常脑组织体积)/非缺血侧体积×100％，非缺血侧体积或者缺血

8、侧正常脑组织体积=(s1+s2+s3+s4+s5)×2。其中s1～s5表示5张切片应该计算的面积，2表示每片厚度(mm)。1.3.3VEGF蛋白检测采用SABC免疫组织化学染色法。严格按试剂盒说明进行操作。DAB显色，光镜下观察，胞浆出现棕色颗粒为阳性着色。高倍镜(400倍)下在皮质区和纹状体区随机取4个视野计数阳性细胞。即用型SABC试剂盒、兔抗大鼠VEGF多克隆抗体试