痔疮组织中血管内皮生长因子的表达及意义论文

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1、痔疮组织中血管内皮生长因子的表达及意义论文.freel，贴片于涂有多聚赖氨酸的洁净载玻片上，置于烤箱烤干待用。常规HE染色和免疫组织化学S-P法检测血管内皮生长因子（vascularendothelialgro，常规脱蜡至水，蒸馏水洗;②3%过氧化氢，37℃孵育10min以抑制内源性过氧化物酶活性，PBS洗4×5min;③VEGF采用微波抗原修复（3档，10min），PBS洗4×5min;④正常羊血清37℃孵育10min以减少非特异性反应;⑤一抗VEGF37℃孵育1h，PBS洗4×5min;⑥生物素标记的二抗，37℃孵育1

2、0min，PBS洗4×5min;⑦链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶复合物37℃孵育10min，PBS洗4×5min;⑧DAB显色液显色，自来水冲洗终止反应;⑨苏木精复染，脱水，透明，封片。用PBS代替一抗作为阴性对照。2.4免疫组织化学结果判断VEGF相关抗原以胞浆出现棕黄色颗粒为阳性反应。阴性对照组除细胞核染成蓝色外，胞浆内无棕黄色反应物。采用HPIAS-2000高清晰度彩色病理图文报告管理系统（同济千屏影像公司）对VEGF表达进行定量分析，每张切片随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野（×400），测定每个视野下VEGF阳

3、性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积，计算阳性面积率。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值。阳性面积率=单位面积中阳性反应的总面积/单位面积中细胞的总面积×100%2.5统计学处理对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率作单因素方差分析和SNK-q检验，检验水准α为0.05。3结果3.1HE染色正常对照组可见肛管黏膜下为海绵状的血管组织，并有丰富的动、静脉吻合管，又称为直肠海绵体，是由血管、平滑肌、弹力纤维和结缔组织所构成的，其血管和结缔组织结构正常。痔疮组可见病变区血管

4、扩张，血液淤滞，组织水肿，血凝块形成，以及纤维断裂。有部分严重病例可见局部组织坏死、糜烂出血。3.2VEGF的表达痔疮组血管内皮细胞胞浆内可见较多棕黄色颗粒沉积，VEGF表达呈阳性;正常对照组血管内皮细胞胞浆内无棕黄色颗粒沉积，VEGF表达呈阴性。图像分析结果显示:痔疮组中VEGF的平均光密度为0.1853±0.0211，正常对照组中VEGF的平均光密度为0.1043±0.0117;痔疮组中VEGF的阳性面积率为0.3761±0.0527，正常对照组中VEGF的阳性面积率为0.0869±0.0183。见表1。表1VEGF在

5、痔疮组和正常对照组中表达的平均光密度和阳性面积率（略）注:*痔疮组与正常对照组比较，P0.01。4讨论痔是肛垫病理性肥大、移位及肛周皮下血管丛血流淤滞形成的局部肿块。目前认为成痔的原因与解剖、感染、便秘、不良的排便习惯、饮食习惯、遗传、职业、疾病、妊娠和分娩等各种因素有关［1］。常见有以下几种原因:①习惯性便秘，腹压增加;②经常吃刺激性食物及饮酒;③慢性腹泻;④门静脉压力增高;⑤妊娠、盆腔肿瘤、排尿困难等;⑥年老体弱、肌肉无力、组织松弛。“肛垫”又称痔的原发区，是痔现代概念的解剖生理学基础［2］，是肛管黏膜下为海绵状的血管

6、组织，并有丰富的动、静脉吻合管，又称为直肠海绵体，是由血管、平滑肌、弹力纤维和结缔组织所构成的。肛垫上皮有精细的辨别觉，有多种化学性和机械性受体，可引发保护性肛门反射，对维持正常排便活动有着极其重要的意义。肛垫黏膜下层有丰富的动静脉吻合管，使肛垫静脉丛的功能接近动脉血管。从18世纪开始，痔被认为是直肠下端或肛管存在丰富的静脉丛［3］，如果在一处或数处发生扩张或曲张，即成为痔，亦即痔是突出的静脉团，是各种原因造成的血管病变。血管内皮生长因子又称血管通透因子（Vascularpermea-bilityfactor，VPF）或血

7、管调理素（Vasculotropin），是1989年Ferrara［4］等在牛垂体滤泡星状细胞体外培养液中首先纯化出来的糖蛋白。随后在鼠垂体前叶肿瘤细胞系AtT20、人单核细胞、鼠神经胶质瘤细胞系等细胞培养液中也纯化出了VEGF蛋白。VEGF是已知最强的血管通透剂，可达组胺的50000倍，且不能被组胺抑制剂所阻断［5］。VEGF可以增加毛细血管后静脉和小静脉的通透性，其作用机制是:VEGF结合血管内皮细胞在管腔外侧VVO（vesiculo-vacuolarorganelle）的细胞器上［6，7］，VEGF作用后，引起VVO

8、囊液泡间膜的开启，促进大分子物质跨内膜转运;血管通透性的增加导致间质水肿，血液中的血浆蛋白、纤维蛋白质、液体等外渗，引起细胞外基质改变，为血管内皮迁移提供支架，在多种细胞因子和蛋白溶酶的协同作用下，迁移的细胞分裂增殖形成新生血管芽［8］。VEGF能特异性地促血管内皮细胞分裂增殖，促血管生成，同时增加血管