痔疮组织中血管内皮生长因子的表达及意义

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1、痔疮组织中血管内皮生长因子的表达及意义：徐跃军　张端莲　吴惠芬蔡丽华【摘要】目的:观察血管内皮生长因子在痔疮组织中的表达及临床意义。方法:收集武汉市第八医院肛肠科手术切取的痔疮组织40例，另取痔疮组织周围正常组织5例作对照。应用免疫组织化学方法检测痔疮组织及周围正常组织中血管内皮生长因子的表达，利用HPIAS-2000图像分析系统测定血管内皮生长因子在以上两组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果:痔疮组血管内皮细胞内血管内皮生长因子呈阳性表达，正常对照组血管内皮细胞内血管内皮生长因子呈阴性表达。免疫组织化学

2、结果表明痔疮组血管内皮细胞内血管内皮生长因子表达明显高于正常组织血管内皮细胞，有显著性差异（P<0.01）。图像分析结果显示，痔疮组与正常对照组之间血管内皮生长因子平均光密度及阳性面积率的差异有显著性意义（P<0.01）。结论:血管内皮生长因子在痔疮的形成过程中起了重要的作用。【关键词】痔疮;血管内皮生长因子;免疫组化　　痔是人类常见的一种疾病。痔被认为是直肠下端或肛管存在丰富的静脉丛，如果在一处或数处发生扩张或曲张，即成为痔，亦即痔是突出的静脉团，是各种原因造成的血管病变，但确切机制还不清楚。血管

3、内皮生长因子（vascularendothelialgro，贴片于涂有多聚赖氨酸的洁净载玻片上，置于烤箱烤干待用。常规HE染色和免疫组织化学S-P法检测血管内皮生长因子（vascularendothelialgro，常规脱蜡至水，蒸馏水洗;②3%过氧化氢，37℃孵育10min以抑制内源性过氧化物酶活性，PBS洗4×5min;③VEGF采用微波抗原修复（3档，10min），PBS洗4×5min;④正常羊血清37℃孵育10min以减少非特异性反应;⑤一抗VEGF37℃孵育1h，PBS洗4×5min;⑥生物素标记的二

4、抗，37℃孵育10min，PBS洗4×5min;⑦链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶复合物37℃孵育10min，PBS洗4×5min;⑧DAB显色液显色，自来水冲洗终止反应;⑨苏木精复染，脱水，透明，封片。用PBS代替一抗作为阴性对照。　　2.4免疫组织化学结果判断VEGF相关抗原以胞浆出现棕黄色颗粒为阳性反应。阴性对照组除细胞核染成蓝色外，胞浆内无棕黄色反应物。采用HPIAS-2000高清晰度彩色病理图文报告管理系统（同济千屏影像公司）对VEGF表达进行定量分析，每张切片随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野（×4

5、00），测定每个视野下VEGF阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积，计算阳性面积率。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值。阳性面积率=单位面积中阳性反应的总面积/单位面积中细胞的总面积×100%　　2.5统计学处理对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率作单因素方差分析和SNK-q检验，检验水准α为0.05。　　3结果　　3.1HE染色正常对照组可见肛管黏膜下为海绵状的血管组织，并有丰富的动、静脉吻合管，又称为直肠海绵体，是由血管、平滑肌、弹力纤维和结缔组织

6、所构成的，其血管和结缔组织结构正常。痔疮组可见病变区血管扩张，血液淤滞，组织水肿，血凝块形成，以及纤维断裂。有部分严重病例可见局部组织坏死、糜烂出血。　　表1VEGF在痔疮组和正常对照组中表达的平均光密度和阳性面积率（略）　　注:*痔疮组与正常对照组比较，P<0.01。　　4讨论　　痔是肛垫病理性肥大、移位及肛周皮下血管丛血流淤滞形成的局部肿块。目前认为成痔的原因与解剖、感染、便秘、不良的排便习惯、饮食习惯、遗传、职业、疾病、妊娠和分娩等各种因素有关［1］。常见有以下几种原因:①习惯性便秘，腹压增加;②经

7、常吃刺激性食物及饮酒;③慢性腹泻;④门静脉压力增高;⑤妊娠、盆腔肿瘤、排尿困难等;⑥年老体弱、肌肉无力、组织松弛。“肛垫”又称痔的原发区，是痔现代概念的解剖生理学基础［2］，是肛管黏膜下为海绵状的血管组织，并有丰富的动、静脉吻合管，又称为直肠海绵体，是由血管、平滑肌、弹力纤维和结缔组织所构成的。肛垫上皮有精细的辨别觉，有多种化学性和机械性受体，可引发保护性肛门反射，对维持正常排便活动有着极其重要的意义。肛垫黏膜下层有丰富的动静脉吻合管，使肛垫静脉丛的功能接近动脉血管。从18世纪开始，痔被认为是直肠下端或肛管存在

8、丰富的静脉丛［3］，如果在一处或数处发生扩张或曲张，即成为痔，亦即痔是突出的静脉团，是各种原因造成的血管病变。血管内皮生长因子又称血管通透因子（Vascularpermea-bilityfactor，VPF）或血管调理素（Vasculotropin），是1989年Ferrara［4］等在牛垂体滤泡星状细胞体外培养液中首先纯化出来的糖蛋白。随后在鼠垂体前叶肿瘤细胞系AtT20、人单核细胞