tpx2基因为靶向的sirna干扰治疗宫颈癌的体内实验研究

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1、河北医科大学硕士学位论文TPX2基因为靶向的siRNA干扰治疗宫颈癌的体内实验研究姓名：徐杰申请学位级别：硕士专业：妇产科学指导教师：程建新201203中文摘要TPX2基因为靶向的siRNA干扰治疗宫颈癌的体内实验研究摘要目的：宫颈癌是危害女性身心健康的主要恶性肿瘤之一，在人类恶性肿瘤中位于第五位，在女性恶性肿瘤中其发病率与病死率居于第二位。TPX2是一种严格受到细胞周期调控的核增殖相关蛋白，参与细胞有丝分裂中纺锤体及微管的装配过程。TPX2基因扩增或过表达将导致中心体扩增、染色体分离异常、DNA异倍体及多倍体的出现。目前己证实TPX2在多种肿瘤组织及肿瘤细胞系中存在扩增现象

2、或表达水平上调。本课题组的前期体外实验证明了TPX2在宫颈癌组织中存在着明显的表达上调现象，TPX2．siRNA能有效抑制宫颈癌细胞系Hela细胞表达TPX2mRNA和蛋白质、降低细胞增殖和侵袭能力，有利于抑制肿瘤生长，甚至达到消除肿瘤的目的。本研究采用本课题组设计的TPX2．siRNA及转染的Hela细胞系，从体内实验角度研究TPX2．siRNA对TPX2蛋白质表达的沉默效应、肿瘤生长抑制作用及治疗的效果。方法：选取4周龄雌性裸鼠16只，随机分为4组(TPX2．siRNA转染组、TPX2．siRNA治疗组、空白对照组、阴性siRNA对照组)，每组4只。于裸鼠右前肢腋窝皮下按

3、组别分别接种已转染TPX2．siRNA的Hela细胞系(TPX2．siRNA转染组)及未转染Hela细胞系(TPX2．siRNA治疗组、空白对照组、阴性siRNA对照组)建立肿瘤模型，并于接种后第6天开始，TPX2．siRNA治疗组给予TPX2．siRNA．脂质体混合物溶液0．1ml(含TPX2．siRNA10ug)瘤体局部注射，阴性siRNA对照组给予对照siRNA．脂质体混合物溶液O．1ml(含阴性对照siRNAloug)瘤体局部注射，空白对照组给予培养基O．1ml瘤体局部注射，TPX2．siRNA转染组仅进行观察不给予特殊处理。以上治疗方法，每4天给予一次，共计给予6次

4、，第30天断颈处死所有组别裸鼠结束实验。连续观察30天，记录移植瘤出现的时间，游标卡尺测量瘤体的长轴和短轴计算移植瘤体积，绘制肿瘤生长曲线并对数据进行统计学分析。处死裸鼠后，测量各组移植瘤标本的长短轴及重量，对移植瘤标本的体积及重量进行统计学分析，并通过对移植瘤的组织切片行免疫组化染色研究TPX2．siRNA对TPX2蛋白质表达的抑制中文摘要情况。结果：l裸鼠皮下移植瘤成瘤时间及活体生长情况。TPX2．siRNA转染组、TPX2．siRNA治疗组、空白对照组及阴性siRNA对照组分别在接种9．374-0．75、4．374-0．48、4．504-0．07、4．124-0．25天

5、出现移植瘤结节并随时间推移逐渐增大，成瘤率均为100％。TPX2．siRNA转染组与TPX2．siRNA治疗组、空白对照组及阴性siRNA对照组的成瘤时间两两比较，TPX2-siRNA转染组裸鼠成瘤时间延迟，其差异均具有统计学意义(PO．05)。TPX2-siRNA转染组和TPX2．siRNA治疗组移植瘤的生长趋势与空白对照组及阴性siRNA对照组相比有差异，其差异具有统计学意义(P

6、瘤生长曲线。TPX2．siRNA转染组和TPX2．siRNA治疗组裸鼠皮下移植瘤体积及生长速度与空白对照组和阴性siRNA对照组相比明显降低。TPX2．siRNA治疗组移植瘤生长速度平稳、缓慢。TPX2．siRNA转染组接种经转染的Hela细胞的初期，移植瘤生长速度低于TPX2．siRNA治疗组，实验后期其生长速度有加快趋势，但仍然低于空白对照组和阴性对照。3TPX2的表达对裸鼠移植瘤体积及重量的影响。TPX2．siRNA转染组移植瘤最终体积为(61．875±25．702)mm3，重量为(52．925±18．892)g。TPX2．siRNA治疗组移植瘤最终体积为(58．617

7、5+27．231)mm3，重量为(41．950_+12．972)g。空白对照组移植瘤最终体积为(608．250+359．378)mm3，重量为(407．800---174．339)g。阴性siRNA对照组移植瘤最终体积为(569．625±196．221)nun3，重量为(452．700+111．722)g。TPX2．siRNA转染组和TPX2．siRNA治疗组、空白对照组和阴性siRNA对照组相比较移植瘤最终的体积和重量均无明显统计学差异(P>O．05)。TPX2．siRNA转染组与TPX2．siRNA