survivin基因为靶向的rna干扰治疗上皮性卵巢癌的体内实验研究

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1、重庆医科大学硕士研究生学位论文关键词：Survivin，卵巢肿瘤，细胞株SKOV3第二部分RNA干扰沉默Survivin基因在体内对SKOV3细胞生物学行为的影响目的：根据Survivin基因高表达于上皮性卵巢癌以及pshRNA．Survivin抑制SKOV3细胞内Survivin基因表达、介导细胞凋亡的特点，将pshRNA．Survivin及对照质粒PTZU6+I转染至SKOV3后，将细胞接种至裸鼠皮下，观察成瘤情况，了解RNA干扰Survivin基因后对SKOV3生物学行为的影响。方法：1．重组质粒pshRNA-Survivin

2、及对照质粒PTZU6+1以脂质体转染至细胞SKOV3。2．转染后的细胞接种子裸鼠皮下，测量肿瘤最大径及最小径，观察成瘤情况。3．HE染色观察肿瘤组织的病理特征。4．半定量RT-PCR、免疫组织化学检测移植瘤的Survivin表达情况。5．TLrNEL检测移植瘤的细胞凋亡情况。结果：1．RT-PCR示Survivin基因的表达抑制率为85．32％，说明pshRNA．Survivin瞬时转染SKOV3后，对内源性Survivin基因的封闭是有效的。重庆医科大学硕士研究生学位论文2．SKOV3／pTZU6+1组在第1O天100％成瘤，SK

3、OV3JpshRNA．Survivin组第19天100％成瘤。与PTZU6+I／SKOV3组比较，从肿瘤接种后的8天开始至接种后19天，pshRNA．SuⅣivin／SKOv3组肿瘤生长受到明显抑制，P<0．05。3．接种转染质粒的SKOV3细胞19天后，pshRNA．Survivin／SKOV3组和PTZU6+I／SKOV3组瘤块重量有显著性差异，P<0．05。4．HE染色病理诊断为卵巢浆液性上皮肿瘤组织。5．RT-PCR和免疫组化示两组移植瘤Survivin表达无明显差异。TUNEL示两组移植瘤细胞凋亡率表达无明显差异，P>O．

4、05。结论：Survivin参与了卵巢癌的发生和发展，以Survivin基因为靶点的RNAi能明显促进SKOV3细胞的凋亡，抑制其增殖。重组质粒pshRNA—Survivin能明显抑制卵巢癌细胞SKOV3在动物实验中发展成为实体瘤的速度和程度，在肿瘤发生的早期有明显的预防和治疗作用。关键词：su磁新i卵粤肿话，细胞株芦面对3，RNA-干扰，裸鼠第三部分RNA干扰沉默Survivin基因在体内对卵巢癌裸鼠移植瘤的治疗作用目的：进一步探讨在裸鼠皮下接种SKOV3，建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型后，将pshRNA—Survivin于瘤内注射，

5、观察pshRNA．Survivin在体内是否能抑制Survivin表达，促进肿瘤细胞凋亡，抑制瘤体的生长。方法：6重庆医科大学硕士研究生学位论文1．建立人卵巢癌裸鼠移植瘤模型。2．按5组(1．脂质体组、2．pshRNA-Survivin组、3．脂质体／pTZU6+1组、4．脂质体／pshRNA—Survivin组和5．生理盐水组)进行瘤内注射。测量肿瘤最大径、最小径，计算肿瘤体积，称量裸鼠体重。3．肿瘤组织及裸鼠肝脏、肾脏HE染色。4．半定量RT-PCR、免疫组织化学检测移植瘤的Survivin表达情况。5．TUNEL检测移植瘤的细

6、胞凋亡情况。结果：1．接种SKOV3细胞的裸鼠第10天100％成瘤，肿瘤的平均直径为0．4．0．6cm。2．裸鼠体重：组间比较，第11天，第4组与第1组比较差异有显著性；第13天，第2组与第1、3、5组比较差异有显著性，第4组与第1、3、组比较差异有显著性。第3组第13天的体重与第3、5、7和第9天比较差异有显著性，第4组第l天的体重与第9和第ll天比较差异有显著性，第5组第13天的体重与第5和第7天比较差异有显著性，P<0．05。3．肿瘤体积：在第7、9和第11天，第1、3和第5组的肿瘤体积与第2、4组比较差异有显著性；在第13天

7、，第1、3和第5组的肿瘤体积与第4组比较有显著性差异，第2组与第5组比较有显著性差异；在第5天，只有第5组与第2、4组有显著性差异；在第1和第3天，各组间比较均无明显差异。P<0．054．HE染色示各组肝、肾组织无明显病理组织学异常，肿瘤组织经病7重庆医科大学硕士研究生学位论文理诊断为卵巢浆液性上皮肿瘤组织。5．免疫组化：经过病理影象多媒体对5组裸鼠移植瘤组织中Survivin蛋白的表达进行图象分析示第1、3和第5组的平均光密度与第2、4组比较具有显著性差异，P<0．05。6．RT-PCR：以13-actin基因扩增条带的亮度为10

8、0％，方差分析显示第1、3和第5组的Survivin基因的扩增条带平均相对亮度与第2、4组比较具有显著性差异，P<0．05。7．TUNEL：方差分析显示第l、3和第5组的裸鼠肿瘤组织的凋亡细胞率与第2、4组比较具有显著性差异，P<0．