rna干扰fut6对人肝癌细胞hepg2侵袭迁移的影响

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1、广州医学院硕士学位论文广州医学院硕士研究生学位论文RNA干扰FUT6对人肝癌细胞HepG2侵袭迁移的影响EffectofFUT6inhibitionbysiRNAonInvasionandMetastasisofhumanHepatomaHepG2cells专业：外科学硕士研究生：向广阳导师：陈德教授中国•广州2012年3月1广州医学院硕士学位论文目录中文摘要………………………………………………………3英文摘要………………………………………………………5中英文索引表……………………………………………………7前言………

2、………………………………………………8材料和方法……………………………………………………10结果………………………………………………………23讨论………………………………………………………26结论………………………………………………………33参考文献………………………………………………………34附图………………………………………………………39综述………………………………………………………43致谢………………………………………………………50学位论文原创性声明…………………………………………51学位论文知识产权权属声

3、明…………………………………51关于学位论文使用授权的说明………………………………512广州医学院硕士学位论文RNA干扰FUT6对人肝癌细胞HepG2侵袭迁移的影响专业：普通外科硕士研究生：向广阳导师：陈德教授中文摘要目的探讨针对α1,3岩藻糖基转移酶-Ⅵ（α1,3-fucosyltransferase-Ⅵ，FUT6）的小干扰RNA（smallinterferenceRNA，siRNA）瞬时转染高表达靶基因的人肝癌细胞株HepG2，较全面的观察转染后FUT6基因的沉默对肝癌细胞株HepG2生物学特性的影响，初步探讨F

4、UT6基因在肝癌细胞侵袭和转移中的作用，对肝癌FUT6基因治疗的可行性提供初步依据。方法通过荧光定量PCR（Real-timePCR）检测3种肝癌细胞株HuH-7，SMCC-7721和HepG2相比较于正常肝细胞株HL-7702的α1,3岩藻糖基转移酶（FUTs）表达的差异，确定在肝癌细胞中特异性表达的α1,3岩藻糖基转移酶亚型。靶向FUT6的siRNA转染肝癌细胞株HepG2后，通过westernblot检测FUT6蛋白的表达，通过流式细胞术检测肝癌细胞表面抗原唾液酸路易斯糖（SialylLewisX，sLeX）表

5、达情况。Transwell小室方法进行细胞迁移和侵袭实验检测肝癌细胞株HepG2转移和侵袭能力的变化。结果以正常肝细胞株HL-7702的个基因表达量为基准，FUT6的基因表达量在三个肝癌细胞株HuH-7，HepG2和SMCC-7721分别是基准表达量的25.0，3.8和2.6倍。另外两个α1，3岩藻糖基转移酶：FUT4和FUT7，分别在HL-60细胞株中升高10.8和250.0倍，但是它们在肝癌细胞株中是不升高甚至明显降低。FUT9在HuH-7细胞株中升高了400.0倍，但在其他肝癌细胞株HepG2和SMCC-772

6、1中不升高。在HepG2细胞中FUT6升高是排他性的，我们选择在肝癌细胞株HepG2中研究FUT6。3广州医学院硕士学位论文实验分为3组，分别命名为control（空白对照组），mock（阴性对照scrambled-siRNA）和siRNA-FUT6（实验组）。实验组FUT6蛋白较空白对照组降低75.8%，阴性对照组与空白对照组无明显差异。实验组sLeX抗原较空白对照组降低89.3%，阴性对照组与空白对照组无明显差异。相比于空白对照组，实验组细胞的迁移能力降低了73.3%，侵袭能力降低了73.7%。结论肝癌细胞株高表

7、达FUT6基因；siRNA靶向沉默FUT6减少了FUT6蛋白的表达，减少了肿瘤相关抗原sLeX的表达，削弱HepG2细胞在体外的迁移和侵袭能力。关键词：α1,3岩藻糖基转移酶Ⅵ；肝细胞癌；唾液酸化的LewisX抗原；RNA干扰4广州医学院硕士学位论文EffectofFUT6inhibitionbysiRNAonInvasionandMetastasisofhumanHepatomaHepG2cellsDiscipline:GeneralSurgeryName:XiangGuang-yangSupervisor:Pro

8、fessorChenDeABSTRACTObjective:smallinterferenceRNA(smallinterferenceRNA,siRNA)targettoα1,3fucoseglycosyltransferase-Ⅵ(α1,3-fucosyltransferase-Ⅵ,FUT6)wastransientlytransfecte