琼脂扩散法测定乳链菌肽效价的优化

《琼脂扩散法测定乳链菌肽效价的优化》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、※生物工程食品科学2007,Vol.28,No.03175琼脂扩散法测定乳链菌肽效价的优化张国只，陈林海*，杨天佑，陈洪卫，王利敏，段宇珩，秦广雍(郑州大学离子束生物工程省重点实验室，河南郑州450052)摘要：对影响琼脂扩散法测定乳链菌肽效价的四个主要因素：琼脂浓度、Tween20、培养温度、预培养进行了研究。结果表明，0.75%琼脂的效价检测培养基、0.5%Tween20的添加以及30℃培养条件，可提高乳链菌肽效价测定的灵敏度和精确性；4℃预培养有利于乳链菌肽在琼脂中的扩散。关键词：乳链菌肽；琼脂扩散；预培养OptimizationofAgarDif

2、fusionBioassayforNisinZHANGGuo-zhi，CHENLin-hai*，YANGTian-you，CHENHong-wei，WANGLi-min，DUANYu-heng，QINGuang-yong(IonBeamBioengineeringProvincialKeyLab,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China)Abstract：Thefourmajorfactorsagar,Tween20,culturetemperatureandpre-diffusion,affectingthea

3、gardiffusionbioassayfornisinwerestudied.Theresultsshowedthatwhenagarconcentrationis0.75%,theadditionofTween200.5%,andtheculturetemperature30℃,theaccuracyandsensitivityofagarbioassayfornisincanbeimproved.Andthepre-diffusionat4℃canenhancethediffusionofnisininagar.Keywords：nisin；aga

4、rdiffusionbioassay；pre-diffusion中图分类号：Q331文献标识码：A文章编号：1002-6630(2007)03-0175-04乳链菌肽(nisin)亦称为乳酸链球菌素，是由乳酸乳究的基础上，本文对影响nisin在琼脂平板上扩散的主球菌(lactococcuslactis)产生的一种34个氨基酸的多肽抗要因素，如琼脂浓度、培养温度、Tween20、4℃预菌物质，目前作为天然食品防腐剂已经在欧盟(EU)、美培养等进行系统研究，旨在对琼脂扩散法测定nisin效国、中国、巴西等五十多个国家和地区广泛应用。测价的条件进行优化。定ni

5、sin效价的方法主要有琼脂扩散法[1]、浊度检测法1材料与方法[2]、ATP生物荧光法[3]、酶联免疫吸附法[4]、流式细胞术法[5]等方法。琼脂扩散法因具有简单、方便、经济1.1材料的特点，是目前较为常用的检测方法。根据扩散形式1.1.1指示菌的不同，琼脂扩散法可分为直线扩散法、点滴法、滤藤黄微球菌MicrococcusluteusAS1.2156。纸片法、管碟法和打孔法，打孔法和杯碟法应用最为[1,6-10]1.1.2药品和实验器材广泛。nisin标准品、Tween20Sigma公司。琼脂浓度、培养温度、Tween20等因素对琼脂扩[6-8]Prot

6、oCOLSR自动菌落计数仪/抑菌圈测量仪英国散法的nisin效价测定结果均有较大影响。有报道认Synoptics公司。为0.5%琼脂浓度效价检测灵敏度最高，但平板呈半凝固状，不利于效价测定[8]。伊守亮等[7]发现琼脂浓度为1.1.3培养基效价检测培养基[11]：胰蛋白胨0.8%，酵母膏0.5%，1.0g/100ml，培养温度为30℃时测定效果最佳。Wolf等[8]认为Tween20能够促进nisin在琼脂中的扩散，从而葡萄糖0.5%，NaCl0.5%，Na2HPO4·12H2O0.2%，[6-7]琼脂1.5%，pH6.8，0.7×105Pa，灭菌20m

7、in。提高了效价测定的灵敏度，但也有报道认为Tween20对促进nisin在琼脂中的扩散作用影响不大。在现有研牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏0.3%，蛋白胨收稿日期：2006-04-30*通讯作者基金项目：国家重点基础发展计划(973计划)项目(2004CB719604)作者简介：张国只(1978-)，男，硕士，主要从事微生物育种方面研究。1762007,Vol.28,No.03食品科学※生物工程1.0%，NaCl0.5%，pH7.0，1.1×105Pa，灭菌20min。菌圈直径的变化，即测定的精确性，斜率越大扩散性越1.1.4nisin标准液好，反之越差；

8、标准曲线与y轴截距可反映最低nisin效价时，各处理抑菌圈直径的大小，即测定的灵