琼脂扩散法检测卵黄抗体效价影响因素的分析.pdf

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1、山东畜牧兽医2012年第33卷琼脂扩散法检测卵黄抗体效价影响因素的分析王尚明①吴好停②宗玉东③(①山东迅迭康兽药有限公司济南250316②中国兽医药品监察所北京③山东省广饶县畜牧局)中图分类号：$852．4+3文献标识码：C文章编号：1007．1733(2012)I1．0080-03抗体琼脂扩散试验是当前卵黄抗体效价测定的主要1．1．2抗原性质抗原的种类、抗原决定簇的数目和理方法之一，该方法简洁、快速非常适合于临床·和应用，化性质等因素都能影响琼脂扩散试验的结果。琼脂扩散但是该方法容易受到多种因素的影响而导致试验结果判试验是利用可溶性的抗原与抗体在琼脂凝胶网格中的水断的不准确。本文就琼

2、脂扩散试验中抗原抗体本身性中自有扩散，相互结合形成的沉淀线来判断结果的。这质、反应特点、最适比例、可逆性、总量以及琼脂、水样就要求抗原与抗体必须都是可溶性的，因为一些颗粒等所有能影响试验结果的因素进行了逐一分析。性的抗原如细菌、红细胞等是不溶的，这样的抗原相对卵黄琼脂扩散试验是通过抗原、卵黄抗体在琼脂凝应的卵黄抗体效价就不能用琼脂扩散试验来测定。在琼胶中由近及远不断自由扩散形成浓度梯度，在适当比例脂扩散试验中要求抗原是多价的(抗原决定簇≥2)，单价处相遇形成沉淀线，并由此来判断抗体效价的一种技抗原不能形成抗原抗体复合物，因此不能产生可见反术。琼脂扩散试验主要是用于可溶性胶原性抗原及其所

3、应。抗原的分子量、pH值等理化凶素也直接影响到试验对应抗体水平的检测，兽医临床中主要用于法氏囊病、的结果。新城疫等抗体效价的检测。由于卵黄内抗体效价与鸡体1．2抗原抗体的反应特征血清内的效价几乎相同，所以通过琼脂扩散试验测定卵抗原抗体反应特征影响琼脂扩散试验结果的因素黄抗体的效价，可以在不刺激鸡体的情况下就可知道产有：抗原抗体最适比、抗原抗体反应的可逆性、抗原抗蛋鸡的抗体水平和免疫效果。卵黄琼脂扩散试验操作简体的量。单、所用的仪器少、结果易判断。因此被越来越多的养1．2．1抗原抗体的最适比抗原抗休的反应虽决定于两殖户、兽医工作者所采用，成为制定产蛋鸡免疫程序的者的化学构型的相应性，但不

4、同于一般的化学反应，其主要依据。但是琼脂扩散试验的结果容易受到抗原抗体结合比例不完全符合化学反应的质量作用定律，因为抗因素、琼脂、反应条件以及其它因素的影响而导致抗体原抗体的结合是一种多价相互作用的结合。抗原根据分效价测定不准确。为了能使临床中广大实验操作人员在子大小的不同，结合位点变化很大，由lO～50不等，有的琼脂扩散试验中获得一个更加准确的结果及正确认识，甚至达~rJ200个；卵黄中的抗体成份主要是IgG，有2个结现将以上各种影响因素分析如下。合位点，卵黄抗体除了常见的鸡传染性法氏囊病抗体l抗原抗体因素外，还有鸭病毒性肝炎、猪瘟(边传刷等，l999)等高免卵琼脂扩散试验受抗原抗体

5、本身性质、抗原抗体反应黄抗体，这些抗体的效价都可以用琼脂扩散试验来测特点及其它因素的直接影响。定。当抗原抗体的浓度比例适宜时，抗原抗体结合后尚1．1抗原抗体的性质未达到饱和的位点可与其它游离的抗原抗体继续结合，1．1．1抗体性质抗体的特异性与亲和力是影响琼脂扩逐渐形成越来越大的复合物。最后在抗原与抗体孔之间散试验的主要因素。抗体的特异性是由抗体可变区的原形成肉眼可见的；jl：淀线。此时反应最快、最明显。但当子空间排列及其电子结构和极化特性决定的(王明俊等，两者的量不适合时，少的一方在聚合初期就达到饱和，1997)，亲和力是复杂抗原与相应抗体之间的总的结合能沉淀线变得不清晰甚至没有沉淀线

6、，而且沉淀线偏移，力(余传霖等，1998)。抗体的亲和力很低时不易用琼脂扩向量少的一方移动。散试验测定。一般情况下，在免疫初期，卵黄抗体的特1．2．2抗原抗体反应的可逆性抗原抗体之间的结合是异性较高但亲和力不高，后期，卵黄抗体的亲和力高但依靠分子间的近距离力：氢键、范德华力、静电力、疏相应的特异性变低。水作』：H力。两者的距离越近，结合的位点越多，形成的802012年第11期(总第190期近距离力也越大，结合的也越牢固。这些作用力在生理2．3琼脂的浓度状态下最大。由于抗原抗体反应是分子表面的非分子结琼脂凝胶网格允许通过物质的最大分子量与琼脂浓合，所形成的复合物并不牢固，可以随时解离，解

7、离的度成反比见附表(吴冠芸等，1999)。卵黄抗体IgY的分子抗原抗体保持原来的生物活性，可与其它的抗原抗体再量为1．8×10(杨婷婷等，2000)，l％一1．5％的琼脂溶液网格一次结合，在整个反应体系中形成动态平衡，平衡式能允许绝大多数大分子抗原自由扩散，大于这个浓度范为：Ag+A_b-AgAb。这种平衡受到温度、pH等物理的、围的琼脂网格太小不利于大分子抗原如鸡马立克氏病病化学的因素的影响。当温度大于6O℃，pH值降到3以下毒(分子量为1．