资源描述：
《猪皮胶原蛋白提取过程中酶解》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、第３７卷第４期西南大学学报(自然科学版)２０１５年４月Vol?３７No?４JournalofSouthwestUniversity(NaturalScienceEdition)Apr?２０１５DOI:１０?１３７１８/j?cnki?xdzk?２０１５?０４?０１９猪皮胶原蛋白提取过程中酶解条件优化及其结构鉴定①于玮１,王雪蒙１,马良１,２,周梦柔１,张宇昊１,２１?西南大学食品科学学院/国家食品科学与工程实验教学中心,重庆４００７１６;２?农业部农产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室,重庆４００７１６摘要:采用酶法从猪皮中提取胶原蛋白,以胶原蛋白的提取率为评
2、价指标,对工艺中的酶解pH,酶解时间和胃蛋白酶用量３个因素进行优化,实验结果表明,酶解液pH２?２,酶解时间１８h,酶用量１％为最佳工艺组合,在此条件下胶原蛋白提取率可达８４?３５％±０?３３％,纯度为８２?５％±１?６％;所得胶原主要由α,β和γ３种亚基组分组成,具有较高的热稳定性;红外光谱和圆二色谱测定结果显示,其具备典型的胶原蛋白吸收特征,证明胶原天然三螺旋结构保存完整．关键词:猪皮;胶原蛋白;酶法;结构鉴定中图分类号:TS２０１?２文献标志码:A文章编号:１６７３９８６８(２０１５)０４０１０６０８我国是猪肉生产大国,２０１３年猪肉产量约５４０００
3、kt,其中猪皮是猪肉生产的主要副产品之一,约占猪体总质量的１０％,按此计算每年有近５４００kt猪皮产生,但这些猪皮中除部分用于皮革生产外,大部分被[１]废弃,不能充分发挥其价值所在．猪皮中的蛋白质含量高达３３％,其中胶原蛋白含量为８７?８％．因此,以猪皮为原料,提取胶原蛋白并加以利用可极大提高其附加值,减少资源浪费．胶原蛋白的提取有酸法、碱法、酶法等,酸法提取胶原蛋白纯度高,但酸法会使色氨酸全部被破坏,丝[２－３]氨酸和酪氨酸部分破坏,且提取率低,酸法提取率仅为４４?９％;碱法提取会破坏含有羟基和巯基的氨[４][５]基酸且产生消旋,三螺旋结构被严重破坏,研
4、究发现碱法产生的副产物D型氨基酸有致畸、致癌作用．酶法目前应用较多,以胃蛋白酶应用最为广泛,原因在于胃蛋白酶只作用胶原的非螺旋端肽,不会改变胶[６][７]原的三股螺旋结构,引起α１和α２链伸展．胡二坤等研究发现酶可提高胶原蛋白的提取率,但研究得出猪皮胶原蛋白水抽提法最优工艺提取率为７０?５４％,远高于酸碱法．但酶法处理过程中对温度,pH等条件要求严格,工艺的控制不当会影响产品得率并破坏胶原天然结构,使其丧失功能活性．因此对其工艺进行系统优化研究,以通过准确控制工艺参数获得高得率,并保持良好天然结构的胶原蛋白至关重要．本研究采用酶法从猪皮中提取胶原蛋白,对酶
5、法提取酶解工艺条件进行优化,通过差示量热扫描(DSC)、红外光谱、圆二色谱、SDSＧPAGE电泳等分析手段对胶原蛋白三螺旋结构完整性进行了鉴定．旨在保持胶原蛋白完整天然结构的前提下,提高猪皮胶原的提取率,为胶原蛋白产业化生产过程中工艺优化改进提供实验依据．①收稿日期:２０１４０６１５基金项目:国家自然科学基金(３１３０１４２５);中央高校基本科研业务费重点项目(XDJK２０１１B００１)．作者简介:于玮(１９８９),女,山东临沂人,硕士研究生,主要从事食品化学与营养学的研究．通信作者:张宇昊,副教授,博士,硕士研究生导师．２西南大学学报(自然科学版)htt
6、p://xbbjb?swu?cn第３７卷１实验材料及仪器１?１原料与试剂猪皮(８个月左右的长白猪),购于重庆市北碚区天生丽街永辉超市,原料获取后洗净,刮去表层脂肪后,切成约３mm×３mm的小块,真空包装冻藏于冰箱中备用．十二烷基苯磺酸钠(SDBS)、氯化钠、冰醋酸、硫酸、一水柠檬酸、无水乙酸钠、三水?N对甲苯磺酰胺钠盐(氯胺T)、对二甲氨基苯甲醛、高氯酸、正丙醇、异丙醇、甲醇、氢氧化钠、溴化钾,成都市科龙化工试剂厂;羟脯氨酸,上海楷洋生物技术有限公司;十二烷基硫酸钠(SDS)、Tris、过硫酸铵(APS)、β巯基乙醇(２ＧME)、四甲基乙二胺(TEMED)
7、、考马斯亮蓝RＧ２５０,BIOBASIC公司;质量分数为３０％丙烯酰胺(丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺质量比为２９∶１),北京索莱宝科技有限公司;甘氨酸(Glycine)、溴酚蓝(BPB),生工生物工程(上海)有限公司;胃蛋白酶(１∶１００００),北京Solarbio;标准蛋白(分子量１０~２００kDa),加拿大Fermentas公司．Tris,考马斯亮蓝RＧ２５０,３０％丙烯酰胺为优级纯,其余试剂均为分析纯．１?２仪器与设备JA３００３B电子天平,上海精天电子仪器有限公司;DZ６００/２S真空包装机,上海人民包装股份有限公司;FYLＧC０２２料理机,九阳股份有
8、限公司;抽滤装置,重庆龙迎化工有限公司;透析袋(MD:３４,分子截
