酶解法从猪皮中提取胶原的工艺优选

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1、万方数据第17卷第4期2011年2月中国实验方剂学杂志ChineseJoumalofExperimentalTraditionalMedicalFo兀nulaeV01．17．No．4Feb．．20ll酶解法从猪皮中提取胶原的工艺优选张路，代龙‘，杨田义，王徽(山东中医药大学，济南250355)[摘要】目的：筛选蛋白酶酶解猪皮制备胶原的最佳工艺；方法：以胶原得率为指标，采用单因索试验及正交试验对酶解条件进行优选；结果：胃蛋白酶用量为3％，酶解液pH2．0，底物质量浓度l：28，温度O℃，酶解时间48h时胶原的得率最高；结论：胃蛋白酶酶解猪皮制备胶原的工艺较好。[关键词】

2、酶解法；胃蛋白酶；猪皮；胶原【中图分类号】R283．6[文献标识码】A【文章编号】1005-9903(2011)04抑008讲optimizationofExtractionProcessOfCollagenfromPigskinbyEnzymeHydrolysisZHANGLu。DAILong‘。YANGT诅n—yi，WANGHui(5^n凡do，IgDh矗帕，苫i钞矿nid如ion口Zc^i凡eseMed如ine，以n口n250355，C．Ili凡口)[Abstract]objective：Screentheoptimumpreparationforcollage

3、nbyenzymehydrolysis．Method：Enzy-maticconditionwasoptimizedbysingle—factorexperimentsandtheorthogonaldesignwithcollagenyieIdasthein-dex．ResuIt：TheoptimumextI．actionconditionwasobtainedasfollows：theratioofenzyme／substratewas3％，pH2．0，material-Iiquidratiol：28，enzymatichydrolyzedfor48hat0℃．C

4、oncIusion：Preparationforpigskincollagenbypepsinisbetter．[Keywords]enzymatic；pepsin；porcineskin；collagen近年来，胶原作为药物载体在医药领域得到广泛的应用，如治疗局部组织感染的胶原膜、用于创面止血的胶原海绵等等。胶原是由三股左手螺旋的多肽链互相缠绕而成，这些肽链被称为仪．肽链，相对分子质量在300×103左右oo。胶原的三螺旋结构受温度的影响很大，在15—95℃的升温过程中，肽链之间的氢键断裂．导致胶原分子解旋，分子结构从有序态变为无序态忙1。由于具有完整三螺旋结构的胶

5、原才有生物活性。因此，提取胶原的关键就是保护三螺旋结构不被破坏。本研究建立了一种采用胃【收稿日期】[基金项目】[第一作者】【运讯作者】·8·20lo(H27(013)国家“十一五”科技支撑计划(加呕BAl53肋_73)张路．在读硕士研究生，研究方向：中药药荆新技术、新剂璺．E．mail：zIl蚰鼻Iu3098@163．c咖’代龙，教授．磺士研究生导师．Tel：13156189167．E·mail：d“Iongdailong@263．Ⅱet蛋白酶酶解猪皮制备胶原的方法，胶原提取工艺高效简洁，适合规模化生产。l材料1．1仪器Lc．20lOA型高效液相色谱仪(日本岛津)，K

6、Rl00—5C18(4．6mmx150mm，5斗m)，DYY_6C型电泳仪(北京市六一仪器厂)。·1．2试剂与药材甲醇(天津四友生物医学有限公司)为色谱纯；其余均为分析纯；水为重蒸水；猪皮(购自济南维尔康肉制品厂，冷冻鲜品，符合食品标准，水分65％，总灰分0．67％，脂肪3．89％)。胃蛋白酶(批号090505，酶活力l：3000，上海蓝季科有限公司)；胰酶(批号F20071130，酪蛋白转化力≥25％，国药集团化学试剂有限公司)；木瓜蛋白酶(批号090815，30万U·g～，上海蓝季科有限公司)；己．羟脯氨酸对照品(批号ll1578-20020l，中国药品生物制品检

7、定所，供含量测定用)；SDS-PAGE高、次高分子量标准蛋白(购自中科院上海生物化学万方数据张路，等：酶解法从猪皮中提取胶原的工艺优选研究所)。2方法与结果胶原制备工艺流程：去毛脱脂的猪皮碎屑一加酶搅拌酶解一杀酶一盐析_+脱盐一酸复溶一盐析_+脱盐一干燥_成品胶原。2．1不同蛋白酶的考察考察木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰酶对猪皮胶原得率的影响。酶解条件为：酶用量(蛋白酶占猪皮干重的比例)2％，温度0℃，底物质量浓度l：20，pH2．5，酶解48h，得率分别为33．35％。39．45％，26．46％，胃蛋白酶的得率最高，因此对胃蛋白酶限制性酶解的条件进行优选