高硫酸化魔芋葡甘低聚糖结构特征与抗病毒活性研究

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1、湖北工业大学硕士学位论文摘要本研究以丙酯化魔芋葡甘低聚糖(KGM)为原料，经甲酰胺一氯磺酸酯化得到魔芋低聚KGhi醛酸丙酯硫酸酯钠盐(Hydroxylpropyl01igo—konjac6lucomannannuroateSulfate，HOGS)。本论文主要从HOGS的分离纯化、结构分析和抗病毒活性三个方面进行研究。(1)甲酰胺～氯磺酸法制备HoGS，乙醇沉淀法提取，717阴离子交换树脂分离纯化，然后进行透析脱盐，冷冻干燥后得到纯净的HOGS。硫酸一蒽酮法测定其糖含量为64．09％，比浊法测定其硫酸基含量为33．11％。

2、采用SephadexG一25凝胶层析和醋酸纤维薄膜电泳进行纯度鉴定，凝胶层析结果显示只有一个峰，醋酸纤维薄膜电泳显示只有一条蓝色条带，表明所得HOGs为一均一成分的低聚糖，然后将一次磺化HOGS样品再次硫酸化，经分离纯化后得二次磺化HOGS样品。(2)利用高效液相色谱(Highperformanceliquidchromatography，HPLC)、傅立叶红外光谱(FourierTransformInfraredSpectrum，Fr-IR)、激光拉曼光谱(LaserRamanSpectrum，RS)、X衍射光电子能谱(

3、X-rayphotoelectronspectroscopy，XPS)、核磁共振波谱(NuclearMagneticResonance，NMR)、凝胶色谱(GelPermeationChromatography，GPc)等现代仪器分析手段对HOGS的结构进行分析。结果表明低聚KGM经丙酯化修饰和硫酸酯化后，糖环的c：和c。位的羟基上和C。位连接的羟丙基上的羟基接有硫酸基团，且硫元素的相对含量为7．94％，二次磺化后得到的HOGS经过)【PS分析显示S元素含量比一次磺化HOGS提高了约40％。(3)在抗脊髓灰质炎病毒(Pv)

4、中采用一次磺化HOGS样品，利用^仃T法研究了HOGS抗PV作用，结果表明HOGS在浓度为1．25mg／mL以内时对Hela细胞无明显细胞毒性作用，细胞的半数中毒浓度Tc。为1．5399mg／m1。将HOGS与病毒的不同作用方式进行分组进行了HOGS抗PV病毒作用的研究。结果表明HOGS对细胞有较好的保护作用，能抑制PV在细胞内的增殖，而且对PV的吸附、穿入等环节随着时恻的延长其效果有所增强，其最小有效浓度为0．01562mg／ml。在抗乙肝病毒(HBV)中同样采用一次磺化HOGS样品，利用MTT法和ELISA法，研究了H

5、OGS对HepG。一2．2．15细胞表达HBsAg、HBeAg的影响。结果表明，HOGS在0．125mg／mL～lmg／mL浓度范围对HepGr2．2．15细胞没有明显的细胞毒性作用，细胞的半数中毒浓度TC。为1．4753mg／IIlL：并且可明显抑制Hep6：一2．2．15细胞HBsAg的表达，其湖北工业大学硕士学位论文半数有效浓度1c。为0．2675mg／mL，抑制指数(TI)达5．52，表明HOGS具有一定的体外抗HBy作用。(4)在抗柯萨奇病毒(CVB。)中采用二次磺化HOGS样品，利用町T法研究了HOGS抗CVB

6、。作用，结果显示HOGS在浓度为0．5mg／ml以下时均无明显细胞毒性作用，细胞的半数中毒浓度T％为0．6677mg／ml。将HOGS与病毒的不同作用方式进行分组进行了HOGS抗CVB，作用的研究。结果显示对CVB。侵入细胞的阻断作用组效果较好，其半数有效浓度IC。为0．1483mg／m1，TI值为4．50：同时将一次磺化HOGS样品抗病毒药效进行对比，对CVB，侵入细胞的阻断作用组Ic。为0．3767mg／ml，TI值为4．09。由此可表明一次及二次磺化HOGS能有效地抗CVB3的作用，且二次磺化HOGS效果更明显。在抗

7、流感病毒中采用二次磺化HOGS样品，采用MTT法测细胞毒性，结果表明H06S在浓度为0．5IIlg／ml以下时均无明显细胞毒性作用，通过测定红细胞血凝效价，得知HOGS可在一定程度上降低病毒感染细胞的血凝效价，其最小有效浓度为0．03125mg／IIlL。与一次磺化HOGS的血凝效价结果进行对比，得知二次磺化HOGS抑制病毒效果明显优于一次磺化HOGS。说明抗病毒活性与硫酸根的含量正相关。关键词：魔芋葡甘聚糖，硫酸酯化，结构分析，抗病毒活性儿湖北工业大学硕士学位论文AbstractInthisstudy,Hydroxylp

8、ropyloligo·konjacglucomannannuroaterHOG)wasusedasrawmaterials，andHydroxylpropyloligo-konjacgJucomannannuroatesulfate(HOGS)wassulfatedbythesulfatedreagen