microrna结合位点单核苷酸多态性和原发性肝癌发生与其预后的关系

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1、目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文MicroRNA结合位点单核苷酸多态性与原发性肝癌发生及其预后的关系前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯···7月U舌“一”“”一”“”“””“一”””””一”“一””一⋯一”““⋯⋯”““”一“。，材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9结果⋯⋯·········⋯····⋯·⋯····⋯·⋯···⋯··········

2、··⋯·一··············16附l羽······⋯······················⋯············⋯···⋯·····⋯⋯··········-·19附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23讨{念···⋯················⋯·······⋯····························⋯·“···“····29结论⋯⋯·········⋯··⋯·······⋯⋯···⋯⋯···········⋯⋯一“一一”·⋯“32参考文

3、献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33综述MicroRNA与原发性肝癌相关研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36致谢····················⋯······⋯··⋯·······⋯·······························44个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45中文摘要MicroRNA结合位点单核苷酸多态性与原发性肝癌发生及其预后的关系摘要目的：MicroRNA(miRNA)是一类小型非编码RNA，由大约22个核苷酸组成，其由染

4、色体DNA编码，在转录后水平发挥调控基因表达的功能。越来越多的研究发现，miRNA具有调节胚胎发育、细胞增殖、分化、凋亡和肿瘤发生等生物学功能，miRNA主要通过与靶mRNA的3’UTR(3’非翻译区)完全或不完全的碱基互补结合，以实现其负性调节靶mRNA的功能，进而调节基因的表达。MiRNA在基因上的结合位点单核苷酸多态·I生(SNP)与人类肿瘤发生关系密切，但关于miRNA结合位点SNP与原发性肝癌关系的研究甚少。本研究拟通过对与肿瘤密切相关的miRNA结合位点SNP进行测序分析，并随访相应原发

5、性肝癌患者，进行生存分析，结合病例一对照研究，鉴定出与肝癌发生及预后相关的特异SNP位点，对分析探讨个体和肿瘤易感因素的关系，筛查易患肝癌的高危人群，以及进行预后的评价，建立有效的预警机制均具有重要意义。方法：1研究对象：肝癌组患者为2007年9月-2008年3月间，在河北医科大学第四医院肝胆外科住院的手术患者，经实验室及影像学等检查，临床诊断为原发性肝癌，行原发性肝癌根治手术，所有患者皆经术后病理明确诊断为肝细胞癌，肝癌组60例原发性肝细胞肝癌的标本，均取白手术切除的肿瘤组织；对照组60例抗凝静脉

6、血标本，均来自2008年10月-2009年4月间，在河北医科大学第四医院采集的正常人静脉血样。2基因组DNA提取：用DNA纯化试剂盒提取组织及血标本的基因组DNA，提取后置于4"C恒温冰箱中保存备用。3PCR(polymerasechainreaction)扩增miRNA结合位点目的片段：在NCBI数据库中查找与12个miRNA结合的SNP位点对应的目的基因，设计PCR扩增引物，用PCR预混试剂盒(无色体系)进行扩增，PCR产物经琼脂糖凝胶电泳证实后，送往上海生物工程技术服务有限公司测序。4随访：通

7、过电话随访原发性肝癌患者术后的生存情况。中文摘要5统计分析：采用t检验比较计量资料，用f检验分析肝癌组与对照组的SNP分布频率，采用Kaplan．Meier方法估计组间生存率和绘制累计生存函数曲线，用Log．Rank方法对各组生存曲线分布的异同进行检验，比较生存率有无差别。所有数据分析应用SPSSIO．0统计软件，P<0．05被认为有统计学意义。结果：对与miRNA在基因上结合的12个SNP位点目的片段进行扩增并测序，发现rsl2583、rsl128665、rsl7703261、rsl4109、rs

8、l7107469、rsl0463六个多态性位点，低频率等位基因出现率极小，测序结果显示其基因型单一，不适宜进行相关分析，因此筛选出rsl044129a、rs4901706、rsl6917496、rsl053667、rsl1337、rs3660六个多态性位点进行随后的研究。1对与miRNA在基因上结合的6个位点的SNP分布频率分析显示，在肝癌组和对照组之间，rsl6917496、rsl053667、rsl1337、rs3660多态性位点各组间比较，发现此四个位点SNP分