光动力法制备dc胶质瘤疫苗抗肿瘤作用的研究

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1、光动力法制各DC胶质瘤疫苗抗肿瘤作用的研究光动力法制备DC胶质瘤疫苗抗肿瘤作用的研究专业：外科学硕士研究生：袁士翔导师：李方成副教授摘要目的：脑胶质瘤是最常见的颅内原发恶性肿瘤，针对它的光动力治疗(photodynamictherapy，PDT)和免疫治疗日渐成为研究的热点。因此本研究通过将PDT和基于树突状细胞(dendriticcell，DC)的免疫治疗结合，将C6胶质瘤细胞经光动力法处理后，用酸洗法获取其表面抗原肽致敏DC制备DC疫苗，研究其诱导的大鼠细胞毒性T淋巴细胞(eytotoxicTlymphocyte，CTL)在体外杀伤C

2、6细胞的活性，以及PDT对C6胶质瘤细胞免疫原性的直接影响，从而为PDT和免疫疗法结合治疗神经胶质瘤找到了新的切入点。方法：自大鼠骨髓分离DC前体细胞，在体外经粒细胞．巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte·macrophagecolonystimulatingfactor，GM-GSF)和白细胞介素-4(interluekin-4，IL-4)诱导、扩增获得成熟DC。C6细胞经PDT处理后，对尚贴壁的细胞以弱酸洗脱法获取其表面抗原：同时从光照后的上清液中直接提取全细胞抗原。而未作PDT处理的C6细胞以弱酸洗脱法或反复冻融法提取抗原。

3、然后分别以这四种抗原致敏DC，制成DC疫苗然后经尾静脉接种SD大鼠，连续3周共3次后，取脾作CTL的体外杀伤活性测定。结果：①本实验诱导培养出的DC具有典型的细胞形态学特征和细胞表面标志物的表达。所培养的DC在后续实验中的使用也证明其抗原呈递功能正常，因此是一种简单实用培养DC的方法。②随着光敏剂浓度及光照时间的增加，肿瘤细胞的死亡率增高，但当死亡率超过某个值以后，继续增加光动力剂量，肿瘤细胞死亡率的升高明显变缓。HMME浓度为5ug／ml，照射时间为2min时，C6细胞死亡率为7004。③四种疫苗诱导CTL的体外杀伤活性：光照后酸洗组为

4、95．5％士o．016，光照后上清组为90．2％士o．024，酸洗组为73．3％士-0．027，冻融组为63．6光动力i上制备DC胶质瘤疫茁抗肿恼作用的研究％士o．049，PBS对照组为O．4％士O．063，几乎无杀伤作用。结果表明PDT后酸洗获得的抗原刺激DC成熟的能力最强，它制备的DC疫苗诱导的CTL体外杀伤率明显高于其它各组。结论：PDT能直接增强肿瘤细胞的免疫原性，用酸洗法获取PDT处理后的肿瘤细胞表面抗原肽制备DC疫苗足一种有前景的新方法。关键词：光动力学疗法；弱酸洗脱法；树突状细胞；胶质瘤疫苗；细胞毒性T淋巴细胞．Ⅱ．光动力法

5、制备DC胶质瘤疫苗抗肿瘤作用的研究Antitumorefficacyofphotodynamictherapy—generateddendriticcellgliomavaccineMajor：surgeryM．Scandidate：YuanShixiangSupervisor：．LiFangehengassociateprofessorAbstractOBJECTIVE：Glmmaisoneofthemostcommonintracraniaimalignanttumorsofhumanbeings．Nowadaysphotodynam

6、ictherapy(PDT)andimmunotherapyhavebecomethekeypointsintheinvestigationoftheglioma．Inourstudy,weusedPDTcombinedwithimmunotherapyofdendriticceUs(DCs)toaimattheeradicationofthe甜ioma．AndtoinvestigatetheantitumorefficiencyofcytotoxicTlymphocytes(CTLs)activatedbyDCspulsedwithan

7、tigenpoptideseIntedfromPDT-treatedC6gliomacellsbymildacid．ThenwecantestthedirectinfluenceofPDTontheimmunogenicityofC6gliomacells．Asaresult,wefindanewjointpointforthecombinationofPDTandimmunotherapyinthetreatmentoftheglioma．METHODS：ProgenitorsofDCsderivedfromratbonemarroww

8、eredifferentiatedandproliferatedintoDCsinmediumsupplementedwithrrlL-4andrrGM-CSF．AfterPDT．tumorc