放射治疗联合dc疫苗抗肿瘤作用与其机制探讨

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1、中文摘要培养箱中9呼育16小时，然后再用LPS(100n咖1)或n盯。Q(10ng／m1)刺激36h进一步诱导DC成熟。以PBS做阴性对照。流式细胞仪分析CDl1c+细胞的MHCII，ICAM．1，CD86的表达。用终浓度25p∥m1的丝裂霉素C处理的DC细胞做为刺激细胞，反应细胞是雌性C57BL／6小鼠的脾细胞。将反应细胞和刺激细胞分别以200：1、100：l、50：1的比例加入到96孔U型板中孵育96小时，孵育完成之前的4h每孔加入20斗lCellTiter96⑧AQueous0neSolutionReagent。用MTS比色法来检测反应细胞增殖情况。4分析X射线联合DC疫苗的抗肿瘤作用

2、及其机制将4T1细胞经皮下接种给雌性、7．8周BABL／c小鼠(6只／组)，X线照射方法为两种，间隔24h连续照射3次，每次10Gy，或30Gy照射1次。然后于瘤内注射DC疫苗(1×106／只)，接瘤后每天观察肿瘤生长情况；分析肿瘤浸润淋巴细胞TIL(tumor—infiltratinglymphocytes)中相关的CD8+T细胞和■Reg细胞数；检测荷瘤鼠脾脏中肿瘤抗原特异性淋巴细胞的CTL活性、T-Reg细胞数以及IFN叫的分泌。利用Real．timePCR方法分别分析肿瘤细胞和TIL中的细胞因子IL．6、IL．10的表达以及趋化因子CXCL16／CXCR6的表达，并对肿瘤信号通路蛋白

3、stat3和NF．1(B的表达进行Westem分析。结果：1采用X射线剂量为lOGy／次照射，间隔24h连续照射三次的方法处理体外培养的4T1细胞，可以诱导细胞凋亡，也可以引起细胞死亡。凋亡率14．88％。于末次照射后24小时，观察到瑚MGB．1的表达有增多趋势，而TGF．p表达有减少趋势。2X射线处理的4T1细胞裂解液联合LPS明显促进DC的活化。与对照组相比，抗原刺激后经LPS诱导的表达CDllc表面标记的DC细胞中ICAM．1、MHCII及CD86的表达明显增多。4T1细胞裂解液负载联合LPS组的DC可以明显刺激同种异体的T淋巴细胞的增殖，并随DC数目的增多而增强。3X射线联合DC疫苗

4、显著抑制肿瘤细胞的生长，其中10Gy／次，间隔24h连续照射3次联合DC疫苗组，肿瘤生长最缓慢；且该组小鼠脾脏淋巴细胞IFN．1，的产生和CTL活性也最强。X射线联合DC疫苗可上调肿瘤组织CD8+T细胞数，虽然对T-Reg细胞数的调节作用不明显，但可增中文摘要加CD8+T／，T-Reg的比例。4与对照组相比，lOGy／次，间隔24h连续照射3次联合DC疫苗组的肿瘤细胞中的IL．6、IL．10表达明显下调，CXCLl6表达有上调趋势；TILs中CXCR6的表达明显上调；IL．6、IL一10表达无明显变化。与对照组相比，10Gy／次，间隔24h连续照射3次组的stat3蛋白的活化受到抑制；NF．

5、迎的表达无明显变化。结论：1X射线促进4T1细胞的HMGB．1的表达，减少TGF—p表达；2X射线处理的4T1细胞裂解液联合LPS明显促进DC的成熟、活化及抗原呈递能力；3X射线联合DC疫苗有协同抗肿瘤作用；4X射线联合DC疫苗明显上调肿瘤组织和荷瘤鼠脾脏CD8+T细胞数，对T-Reg细胞调节作用不明显。但可增加CD8+T／T-Reg的比例；5X射线联合DC疫苗抑制了stat3。IL．6信号通路，有利于改善肿瘤免疫微环境。关键词：X射线；4T1肿瘤细胞；荷瘤小鼠；DC疫苗；免疫微环境英文摘要Studyoftheanti—tumoreffectofX·radiationincombinatio

6、nwithDCvaccineABSTRACTObjectiVe：Radiother印yisoneofthemostimportantmethodsagainstcancer．Inrecentyears，withtheincreasingdeepenedresearchonthemdiobiology’hi曲energyX—raycaninhibitorkilltumorcellsbythemechanismofwhichhasanionisationef．fectinsidetumorceUsanddesnlJctsthestmctureofDNAincancercells．Inadditi

7、on，bymeansofmodi黟ingthetissue鳓ructureandactiVit)，ofthetumor，X-raycanenhancetheimmun-ogenici够oftumorcells，whichreleases“dangersignals”，suchas}IMGB一1andhsp70，andup-regulatestheexpressionofadhesionmolecules，su