leptin在肝脏缺血再灌注损伤中的变化规律与其重组、表达

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1、军医进修学院硕十学位论文英文缩写词索引一军医进修学院硕十学位论文英文缩写词索引二军医进修学院研究生学位论文原创性声明．秉承我院“敬业、勤奋、求实、创新”的学风，本人声明：所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得我院或其他教育机构的学位及证书而使用过的材料，对本文的研究作出贡献的个人或集体，均已在文中做了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一

2、切相关责任。论文作者签名：枷指导教师签名：嬲闺R期：力’7。奎-z；只期：≯，哆一广一≥-，研究生学位论文版权使用授权书本人保证毕业离院后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为军医进修学院或解放军总医院。学院有权保留并向国家有关部门或机构送交论文原件、复印件和电子版本，可以采用影印、缩印、扫描或其它手段保存论文以供被查阅和借阅。学院可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)。论文作者签名：弛础只期：二力，^，≯指导教师签名：笼孵荦同同期：≯矽一一．，一：，矿军医进修学院硕十学位论文第一部分肝脏缺

3、血一再灌注损伤对大鼠Leptin蛋白及mRNA表达水平的影响中文摘要目的：建立大鼠肝脏缺血一再灌注(Isch钿ia—Reperfusion，I／R)损伤模型，探讨大鼠肝脏[／R损伤时血清Leptin蛋白及脂肪组织LeptinmRNA水平的变化规律，探讨影响血清Leptin水平变化的因素，以及此变化规律对机体的影响．方法：将45只体重2209左右的雄性sD大鼠随机分为5组，第一组为假手术组(Sham组)，第二纽为肝脏缺血60min，再灌注60min(160R60)组，第三组为160R150组，第四组为16

4、0R240组，第五组为160R360组．麻醉后，在门静脉分出发向肝脏尾叶的分支上，以动脉夹夹闭肝动脉、门静脉及胆管，建立大鼠肝脏70％I／R损伤模型．动脉夹置入后，关闭腹腔。缺血60min后，取出动脉夹进行再灌注。采用高灵敏鼠Leptin放射免疫分析法测定血清Leptin浓度变化，并采用逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)方法检测脂肪组织Leptinml【NA表达水平的变化．结果：(1)与Sham组(12．01±2．73ng／ml湘比，160R60纠17．77±5．61ng／m1)和160R150组(1

5、7．26±6．13ng／m1)血清Leptin浓度即出现增高趋势，160R360组(19．54土6．04ng／m1)血清Leptin浓度显著增高(q一4．39，P<0．05)．(2)与Sham组相比，160R60组．160R150组和160R240组LeptindNA表达水平无明显改变，160R360组LeptinmI【NA表达水平降低(辉度比值q一4．56，P<0．05)。结论：大鼠70％肝脏缺血一再灌注损伤模型建立成功。Leptin作为一种炎性因子，参与了大鼠肝脏I／R损伤的病理生理改变过程。大鼠血

6、清Leptin浓度在肝脏i／g损伤早期和中期呈升高趋势，但脂肪组织LeptinmRNA表达水平在损伤后期呈下降趋势。【关键词l缺血预处理，再灌注损伤，肝脏；Leptin；放射免疫分析法；逆转录一聚合酶链反应2军医进修学院硕十学位论文第二部分重组人Leptin的表达、纯化及免疫学与生物学活性鉴定中文摘要目的：为了获得重组人Leptin(rh—leptin)蛋白高表达的菌株及大量具有生物活性的rh-leptin蛋白，构建Leptin重组表达载体，筛选阳性质粒，转化感受态细茵进行表达，对rh-leptin蛋白

7、进行复性及纯化，并鉴定其免疫学及生物学活性．方法：提取脂肪组织KNA，通过RT-PCR方法获得用PCR方法扩增人Leptin的编码区，使产物与pGEM-Teasy裁体相连，转染DH5ft．．测序后，选出阳性克隆质粒扩增。将酶切后的leptin片段与pET一28a(+)载体连接，获得leptin的表迭质粒。将重组表达质粒转入BL21(DE3)，测序结果显示Leptin编码区没有突变产生，用IPTG诱导leptin重组蛋白表达．表达产物进行SDS-PAGE电泳及Western印迹杂交进行免疫学分析。并通过K

8、m小鼠减肥实验及胃肠推进率测定实验检验其生物学活性．结果：在包涵体蛋白22kDa处有明显的新增蛋白带，其含量超过总蛋白的50％；经Western-blot证实为重组的人leptin蛋白．大量表达后，经蛋白复性和纯化，通过Km小鼠减肥实验及胃肠推进率测定实验证实重组表达的人Leptin蛋白具有生物学活性．结论：成功构建了rh—leptin的高表达菌株，建立了rh—leptin的纯化与复性方法，经验证表达产物具有免疫学及生物学活性，可供进一步基