人子宫内膜癌中血管内皮生长因子和雌激素受体的表达与相关性探讨

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1、山东大学硕士学位论文人子宫内膜癌中血管内皮生长因子和雌激素受体的表达及相关性探讨专业研究生指导教师妇产科学王文栋张友忠月IJ吾子宫内膜癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，近年来发病率有增高趋势，严重危害女性健康。子宫内膜癌的治疗效果、预后与肿瘤手术病理分期、组织学类型、细胞分级等多项指标有关。近来分子生物学研究发现多种生物学指标影响肿瘤生物学行为、治疗效果及预后。雌、孕激素受体(ER、PR)表达测定己成为I临床治疗前常规检测指标之一。肿瘤组织ER、PR表达水平高，治疗效果及预后好，反之预后差。肿瘤形成源于肿瘤细胞处于不受限制的无限增殖状态

2、，而瘤组织的进一步生长依赖于组织内血管网的快速形成及丰富的血液供应。血管内皮生长因子(VEGF)与血管生成和功能有关，可促进血管生成，增加血管通透性，也称血管通透性因子，与肿瘤中血管生成及转移有关，研究表明VEGF表达水平与肿瘤的预后有关。近来研究发现ER表达影响肿瘤细胞中VEGF的生成和表达，对肿瘤的治疗效果和预后产生影响。本研究用免疫组织化学和原位杂交的方法检测正常子宫内膜、增生过长子宫内膜和子宫内膜癌组织中ER、VEGF的表达，应用计算机图像分析系统分析检测结果，分析ER、VEGF表达与肿瘤临床病理学指标的关系，分析二者表达

3、的关系，研究VEGF在子宫内膜癌中的表达及意义，为l临床治疗方法选择及预测预后提供一定的理论依据和新思路。山东大学硕士学位论文研究资料与方法一、材料1、组织标本正常内膜30例(增生期15例、分泌期15例)、子宫内膜增生30例(单纯增生20例、复合增生10例)。子宫内膜癌50例：按1988年FIGO手术一病理分期标准为I期32例，lI期11例，III期7例；组织学分级为G1期21例，G2期19例，G3期10例；组织学类型为子宫内膜样癌38例，非子宫内膜样癌(腺鳞癌、透亮细胞癌和浆液性乳头状腺癌)12例。2、主要试剂小鼠抗人VEGF抗

4、体：美国MaxinBiotechInc产品；小鼠抗人ER单克隆抗体：美国AntibodyDiagnosticaInc产品；过氧化物酶标志的山羊抗小鼠IgG：美国Dako公司产品。3、主要仪器OlympusBX50型医用显微镜：日本Olympus公司；恒温水浴锅：江苏太仓实验仪器厂；微波炉：日本SANYO公司：低温电冰柜：青岛澳柯玛公司；图像分析仪：德国Leica公司。二、溶液配置1、PBS缓冲液(pH7．2)：NaCl8．59Na2HP043．589KH2P040．389ddH201000ml2、柠檬酸钠缓冲液(pH6．0)[Na

5、3C6I-1507．H2029．49+PBS(pH7．2)500m1]41ml[C6H807．2H2021．09+PBS(pH7．2)500ml】9mlddH，O450ml山东大学硕士学位论文三、方法1、DAKOEnvision免疫组织化学染色(1)石蜡切片经二甲苯脱蜡，梯度酒精至水，磷酸盐缓冲生理盐水(PBS，pH=7．2)冲洗。(2)微波炉O．01mol·L。柠檬酸钠缓冲液(pH=6．O)行抗原修复(5min×2次)，自然冷却。(3)1％过氧化氢封闭内源性过氧化物酶，室温，30min。10％正常山羊血清封闭非特异性抗原，室温，

6、30min，滤纸吸去封闭血清。(4)兔抗人Hsp70、90抗体，小鼠抗人ER抗体，同时设立已知阳性对照、空白对照、正常未免疫小鼠血清替代对照，4。C过夜后37。C孵箱复温lh，PBS振洗5min×3次。(5)滴加过氧化物酶标志山羊抗兔、抗小鼠IgG，37。C孵育30min，PBS振洗5min×3次。(6)DAB显色2～10min，入水浸洗，苏木精复染，1％盐酸酒精分化，梯度酒精脱水、二甲苯透明，中性树脂(DPX)封片。2、结果判定结果判定按照Volm报道的判断标准进行【l】，根据以下两方面的总分进行判断。①选染色均匀的阳性表达区域

7、，以着色细胞占视野细胞总数的多少分级。0：无阳性细胞；1：阳性细胞数<25％；2：阳性细胞数26％～50％；3：阳性细胞数>50％。②按着色细胞染色强弱分。0：阴性；1：弱，淡黄色：2：中等，棕黄色：3：强，棕褐色。按①、②的数值相加判断结果，O～2为阴性(一)；3～4为弱阳性(+)：5～6为强阳性(什)。同时用LeicaQ500Mc图像分析仪检测阳性结果的相对染色强度，每张片子选5个高倍视野(×400)，以颜色为标准作图像分割，测阳性结果的相对不透光度(％)。3、统计学处理实验数据分析采用卡方检验、直线相关分析。山东大学硕士学位

8、论文结果一、子宫内膜VEGF、ER表达分布染色阳性者呈黄色、棕黄色或棕褐色颗粒。ER表达阳性物质位于子宫内膜腺上皮和基质细胞胞核内，见图1A、1B、1C；VEGF表达阳性物质位于细胞浆内，见图2A、2B、2C。二、不同子宫内膜中ER和VEGF的表达