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《川芎嗪对喉鳞癌hep-2细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、川茸嗪对喉鳞癌Hep・2细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制杭州师范大学附属医院耳鼻咽喉头颈外科浙江杭州310015基金项目:浙江省自然科学基金(Y2100578)；杭州市科技发展基金(20110833B09,20130733Q36)?；杭州市医药卫牛科技计划项目(2009B009)；浙江省医药卫牛科技计划项目(2009B129)通信作者：李圆，主治医师，主要从事头颈肿瘤的综合治疗研究［摘要］目的研究川苇嗪对喉鳞癌细胞株Hep・2增殖及侵袭转移的作用。方法经不同浓度川茸嗪分别处理Hep-2细胞，细胞粘附实验、迁移实
2、验及肿瘤体外侵袭实验检测细胞粘附、运动及侵袭能力，RT-PCR检测细胞MMP・2和MMP-9mRNA的表达。结果0.15g/L>0.2g/L川苇嗪能有效抑制Hep-2细胞与FN的粘附能力(P<0・05),0.1g/L、O・15g/L、0.2g/L川茸嗪能显著降低Hep・2细胞的运动能力和侵袭能力(P<0.01)oHep-2细胞中MMP-2无明显表达，MMP-9高表达，O.lg/Lx0.15g/Lx0.2g/L川茸嗪能明显下调MMP-9mRNA的表达(P<0.01)o结论川茸嗪是能抑制Hep-2
3、细胞的粘附、运动和侵袭能力，其作用机制可能与卜调MMP-9mRNA的表达有关。［关键词］川苇嗪；喉鳞状细胞；基质金属蛋白酶・9【中图分类号】R498.2【文献标识码】A【文章编号】1001-5213(2016)08-0023-02喉癌是耳鼻咽喉科常见恶性肿瘤，早期发牛浸润转移是影响牛存质量和导致复发的主要原因。临床上常采取的预防喉癌发牛浸润转移的方法是加大放疗剂量以及延长化疗疗程［1］,同时增加了化疗药物的毒副作用及患者的痛苦和经济负担。近年来，抗肿瘤侵袭转移的研究已受到越来越多的关注和重视，传统中药在这方面具
4、有独特的作用。木实验以喉鳞癌细胞株Hep・2为研究对象，观察川茸嗪对Hep・2细胞增殖、侵袭转移能力和MMPs的影响，进一步探讨川茅嗪的抗肿瘤作用及其机制。1材料和方法1.1细胞株和主要试剂喉鳞癌细胞株Hep・2、小鼠胚胎成纤维细胞系NIH3T3,川茸嗪（MW=248.36,纯度99.6%）,四甲基偶氮啤盐（MTT）、二甲基亚飒（DMSO）,人工重构基底膜胶（Matrigel）,纤维粘连蛋白（FN）,聚碳酸酯微孔滤膜（Millicell小室）。1.2细胞培养和分组Hep-2细胞培养在含10%胎牛血清、100U/
5、ml青霉素、100U/ml链霉素和RPMI1640培养液中，加入川苇嗪，使其终浓度分别为0.1g/L>0.15g/L>0.2g/L,为处理组1、2、3,以Og/L为对照组。各组Hep・2细胞密度为l×108/L,接种于96孔培养板。1.3细胞粘附、迁移及体外侵袭实验⑵调整Hep-2细胞密度为5×108/L,接种于包被FN的96孔培养板。培养lh后，弃上清，PBS冲洗除去未粘附细胞，弃PBS后加MTT液，培养4h,离心5min,弃上清,加入DMSO150μl/孔,振荡2min,酶标仪
6、测各孔细胞490nm处光吸收值（A值），计数粘附细胞数°NIH3T3细胞用无血清RPMI1640培养24h,调整Hep・2细胞密度为l×109/L,将Millicell小室放入24孔培养板，上室加入细胞悬液。培养8h后，取出Millicell小室，收集运动至下室的细胞，MTT法测A值间接计数运动穿膜细胞数。将包被Matrigel和FN的Millicell小室放入24孔培养板，将200μlHep-2细胞密度为l×108/L,接种到上室。培养48h后，取出Millicell小室，固定染
7、色穿过微孔滤膜侵袭至下室的细胞，在400倍倒置显微镜下计数，每张膜取10个视野。1.4RT-PCR检测川苇嗪分别作用Hep・2细胞48h后，各组收集5×106个细胞，提取总RNAo以MMP・2或MMP・9PCR产物光密度值与β-actinPCR产物光密度值的比值作为目的基因mRNA表达的相对值。1.5统计学分析所得结果均用表示，数据分析采用SPSS17.0，计量资料的多组比较采用方差分析，P<0.05有统计学意义。2结果2.1川茸嗪对Hep・2细胞增殖的影响当O.lg/L.0,15g
8、/L.0.2g/L川茸嗪分别作用Hep・2细胞48h后,细胞生长抑制率依次为12.2%.18.9%.27.9%,提示低浓度川茸嗪对Hep・2细胞48h生长抑制率<30%,符合细胞粘附和侵袭实验要求。川茸嗪对Hep・2细胞增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖性。2.2川芦嗪对Hep・2细胞粘附能力的影响川茸嗪作用Hep・2细胞lh后，三个处理组细胞粘附率随川茸嗪浓度的增加而下降。组1与对
