喉鳞癌microrna表达谱变化及mir-125b对喉癌hep-2细胞增殖影响的研究

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1、复旦大学博士论文中文摘要第一部分喉鳞癌mieroRNA表达谱变化及候选靶基因分析背景：microRNA(微小RNA，简称miRNA)是一种非编码RNA，在恶性肿瘤的基因表达转录后调节中发挥作用。本部分研究miRNA在喉鳞癌组织中表达谱变化，为LSCC研究提供了新的方向。方法：通过激光显微切割技术(LCM)分离6例喉癌组织肿瘤细胞，采用miRNA芯片筛查喉癌组织与癌旁正常组织中miRNA表达谱变化，在48对喉癌组织及癌旁正常组织中，采用实时定量PCR技术验证miRNA芯片结果，通过生物信息学软件预测

2、这些差异表达miRNAs的靶基因，在24对喉癌组织中检测候选基因的表达水平。结果：通过miRNA芯片检测，筛查得到29个差异表达的miRNAs，经过实时定量PCR验证后，有6个被证实包括表达上调的miR．21、miR-93、miR-205和miR一708，表达下调的miR．125b和miR．145。使用软件预测共有25个候选靶基因，经检测后有10个候选基因在LSCC中表达水平有差异。结论：这些差异表达的miRNA在喉癌的发生和演进过程中可能发挥了重要作用，并且为miRNA的功能研究提供了方向。第二

3、部分miR．125b通过EIF2C2抑制喉癌I-Iep．2细胞增殖背景：失控的自主性增殖是恶性肿瘤细胞具有的主要特征之一，细胞周期控制紊乱导致肿瘤细胞增殖调控异常。本部分在体外和体内水平研究上调miR-125b对喉癌Hep一2细胞增殖的影响及机制。方法：采用慢病毒载体构建miR．125b表达载体，感染Hep．2细胞后建立能够稳定高表达miR-125b的稳转细胞株Hep．2-miR-125b和对照细胞株Hep．2-vector，WST-1实验检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞周期和凋亡变化。并将H

4、ep．2．miR．125b和Hep．2．vector细胞接种NOD／SCID小鼠，观察小鼠移植瘤生长情况。采用双荧光素酶报告基因检测系统初步验证EIF2C2(eukaryotictranslationinitiationfactor2C．2，真核转录起始因子2C．2)是miR．125b的靶基因，在两株细胞中检测候选基因EIF2C2mRNA表达和蛋白水平变化。结果：Hep．2-miR-125b能够稳定、高水平表达miR．125b，miR-125b过表达后能够抑制Hep．2细胞的增殖能力，抑制NOD／

5、SCID小鼠体内成瘤能力，使Hep．2细胞停滞于GO．G1期，凋亡没有变化。双荧光素酶报告基因检测系统显示miR．125b能够抑制EIF2C2载体40％的荧光素酶活性，验证EIF2C2是miR-125b的靶基因，并在mRNA垄兰苎兰塑兰兰璺二—一一生塞垫墨——————————————————————————————————————————————————————————一．I^JH．K水平和蛋白水平上进一步证实miR．125b可以抑制EIF2C2的表达。结论：上调miR-125b通过靶向EIF2C

6、2抑制喉癌H印．2细胞增殖，本研究为以miR．125b作为靶点治疗喉癌提供了一定的理论依据。关键词：喉鳞癌、microRNA、靶基因、增殖、细胞周期、EIF2C2中图分类号：R739．654复旦大学博士论文英文摘要AbstractPartoneComprehensiveexpressionprofilingofmicroRNAsinlaryngealsquamouscellcarcinomaandscreeningoftargetgenesBackgroundMicroRNAs(miRNAs)ar

7、enon-codingRNAsinvolvedinpost-transcriptionalregulationofgeneexpressionincancerand，providenewperspectivesonthedevelopmentoflaryngealsquamouscellcarcinoma(LSCC)．Methods．LasercapturemicrodissectionWasappliedtoisolateahomogeneousgroupofcellsfromsixLSCCsa

8、mples．miRNAexpressionofsixpairsofLSCCandadjacentnormaltissuesWasscreenedusingmiRNAarray．TheresultsofmiRNAarrayanalysiswerevalidatedin48pairsofLSCCandaajacentnormaltissuesusingquantitativerealtime-PCR．Theputativetargetgeneswerepredictedusingthr