la促进pdtc抑制hep-2细胞增殖作用及其机制初探

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1、坠△堡堂里墅匹控剑壁业：垄塑造燮蕉笠用区基扭盟塑握论文作者签名：指导教师签名：二陋论文评阅人1：评阅人2：评阅人3：评阅人4：评阅人5：答辩委员会主席：委员1：委员2：委员3：委员4：委员5：答辩日期：}IIIIIIIIIIIIIIIIIIIMIIIIIlY2531030杭州师范大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得拯刿堙堑盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料

2、。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：学位论文版权使用授权书年，月2尹本学位论文作者完全了解揎趟竖整盘芏有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权揎刿竖整盘堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：私毒篷8欠导师签名：签字日期：2口『牛年押27马签字日期：致谢●⋯本项研究是在陈建明导师的悉心指导

3、下完成的，陈建明副教授治学严谨，对实验严格要求，不断指引我、带领我、帮助我完成本文研究内容。在此，对陈建明老师的悉心教导表示由衷的感谢。从进实验室开始，就是赵菁师姐带领我学习实验技能，设计实验内容，帮我打好实验基础，并在日常生活中也对我关怀有加。同时，实验室的其他成员，师兄蔡兵、师弟虞游也对我的提供诸多帮助。在此，我还要感谢我的同学陪我渡过三年的硕士生活，正是由于她们的鼓励和帮助才使我克服各种困难，完成学业。杭州师范大学硕士论文摘要喉癌是目前一种常见的头颈部恶性肿瘤，近年喉癌发病率逐年增加。PDTC(Pyrrolidined

4、ithiocarbamicacid)是一种金属螯合剂和抗氧化剂，被用于各种癌症治疗的研究。硫辛酸(Lipoicacid，LA)是一种天然抗氧化剂，其化学名称为1，2一二硫戊环一3一戊酸，目前主要用于糖尿病、高血压等慢性疾病的防治，近年研究发现硫辛酸有抗肿瘤作用。多种手段综合治疗是目前肿瘤治疗的有效手段，本实验以Hep．2细胞为材料，研究LA在与PDTC联合处理中对细胞增殖的影响。为了探究硫辛酸(LA)是否能促进吡咯烷二硫代氨基甲盐酸(PDTC)抑制肿瘤细胞增殖，体外培养人喉癌细胞系Hep．2细胞，加入LA、PDTC或IA+P

5、DTC作用12，24和48h后，用WST-1法和软琼脂集落形成法检测细胞增殖，Hoechst33258染色法和流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果发现LA5～500uM对Hep．2细胞增殖无抑制作用，PDTC5～50rtM能明显抑制Hep．2细胞增殖，PDTC5rtM联合LA5，10，20和40删对Hep．2细胞增殖的抑制率明显高于对照组和PDTC单独处理组。PDTC5州与LA5“M联合用药时，在12～48h范围内对Hcp-2细胞增殖的抑制率呈现时间依赖性，24h后软琼脂细胞集落形成数与PDTC单独处理和LA单独处理组相比

6、明显减少。Hoechst33258染色和流式细胞仪检测结果表明，与PDTC和LA单独处理组比较，PDTC5pM与LA5脚联合用药24h凋亡细胞增加，G2／M期细胞百分率增加。实验说明LA能够促进PDTC抑制Hep一2细胞增殖，并诱导其凋亡。为进一步研究其调控机制，通过PCR检测IFIl6基因表达，设计IFIl6基因shRNA序列，构建IFll6基因干扰表达载体pGreenPuro-IFll6shRNA，转染并建立pGreenPuro．IFIl6shRNA／Hep．2和pGreenPuro—ControlshRNA／Hep-2

7、细胞系，在细胞系基础上通过WST-1检测LA和PDTC联合处理对Hep．2细胞细胞增殖的影响，平板检测集落形成能力，Hoechst33258染色检测细胞凋亡，结果显示LA和PDTC联合处理Hep-2细胞24h后，IFll6基因表达升高；成功构建IFll6基因干扰表达载体pGreenPuro．IFll6shRNA及稳定表达该载体的Hep一2细胞系；IFll6基因干扰后，LA和PDTC联合处理对Hep．2细胞增殖抑制率的影响明显降低，抑制细胞集落形成能力和促进凋亡作用也有所减弱，说明IFll6基因在LA和PDTC联合治疗抑制He

8、p．2增殖中发挥一定作用。最终得出，LA促进PDTC抑制Hep．2细胞增殖，诱导其凋亡，二者联合处理后可能通过上调IFll6基因表达促进肿瘤细胞的凋亡，从而抑T杭州师范大学硕士论文摘要制细胞增殖发挥抗肿瘤活性。本实验以Hep一2细胞为材料，通过LA与PDTC联合处理，更有效地抑制喉癌等恶性