姜黄素抑制肝癌hepg-2细胞增殖作用及其机制研究

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1、分类号：0291，R735.7单位代码：10346密级：学号：2012110486ttomifliJl^HANGZHOUNORMALUNIVERSITY硕士学位论文中文论文题目：姜黄素抑制肝癌HepG-2细胞增殖作用及其机制研究英文论文题目：ResearchontheMechanismInvolvedinCurcumin-suppressedCellProliferationinHumanHepatocarcinomaHepG-2Cells申请人姓名：______虞游指导教师：________陈建明____

2、___合作导师：_____________________专业名称：遗传学研究方向：分子遗传学所在学院：生命与环境科学学院t*论文提交日期2015年03月论文评阅人；h评阅人2:评阅人3:评阅人4.评阅人5:答辩委员会主席：_委员1:_委员2:_委员3:_委员4:_委员5:答辩日期：杭州师范大学研宄生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研宄成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研宄成果，也不包含为获得抗州师范大学或其他教育

3、机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研宄所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解枕州师范大学有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权杭州师范大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以釆用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书）导师签名:、签字日期年致谢值此论文完成暨硕士研究生阶段的学习即将结束之际，在三年的学习生涯里，曾

4、经得到过许许多多老师和同学的热情关怀和无私帮助，在此谨向所有这些给予我无私帮助的他（她）们表示最衷心的感谢和最诚挚的谢意。首先，特别要感谢的是我的导师陈建明副教授对本课题的关心。本课题在选题及研究过程中得到了陈建明老师的悉心指导，每次的电话沟通、电子邮件交流、面谈都能使我茅塞顿开。在课题研究过程中，陈老师多次询问研究进程，并为我指点迷津，帮助我开拓研究思路，精心点拨、热忱鼓励。此外，陈老师在平时的生活中也给予了莫大的关心和照顾，再次向陈建明老师致以最诚挚的敬意和谢忱；感谢我的师姐张艳欧在实验过程中的悉心指导

5、和帮助；感谢我的舍友们（蒋汉伟、傅国权、沈嘉希）在实验给予我的帮助，才使得我的实验数据更加完整；同时，也感谢你们在216宿舍生活中一起创造的快乐氛围；感谢浙江省钱江人才计划（2010R10062）、浙江省新苗人才计划（2013R421053）以及杭州师范大学研究生创新基金（2013）在本课题开展过程的科研经费支持；最后，向我的家人和所有同学致谢，感谢他们对我学习和生活上的支持和关怀。摘要肝癌是起源于肝脏的一种常见恶性肿瘤，近年来在我国其发病率和死亡率的逐年升高给人们的健康生活带来了严重的威胁。姜黄素是中药姜

6、黄的主要活性成分，大量的研究表明其具有抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡的作用，但其确切的分子机制尚不清楚。为了探讨姜黄素对肝癌HepG-2细胞增殖的影响及作用机制，培养的人肝癌细胞HepG-2首先分别利用不同浓度的姜黄素（0-50µmol/L）处理24或48h以及同一浓度（20µmol/L）姜黄素处理不同时间（0,12,24和48h），分析其对细胞增殖及凋亡的影响；然后通过半定量RT-PCR筛选出HepG-2细胞内姜黄素诱导表达的相关基因，并进一步验证；接着，研究姜黄素对筛选得到的Egr-1基因mRNA及

7、蛋白质表达的影响，并设计合成其小发卡RNA（shRNA），构建哺乳动物慢病毒shRNA表达载体pGreenPuro-Egr-1，同时构建Egr-1基因哺乳动物外来过表达载体pEGFP-Egr-1；利用细胞免疫荧光技术，研究姜黄素对HepG-2细胞内Egr-1蛋白分布的影响；通过细胞转染技术，构建了内源性Egr-1蛋白稳定干扰细胞系（HepG-2/pGreenPuro-Egr-1）；然后，在构建的细胞系的基础上，再利用姜黄素处理不同的细胞系，分析Egr-1表达沉默在姜黄素对肝癌细胞增殖及凋亡中作用；通过瞬时转

8、染，进一步研究Egr-1外来过表达对HepG-2细胞中p53及p21表达的影响。WST-1细胞增殖结果表明，不同浓度姜黄素处理相同时间后，随着处理浓度的越高，HepG-2细胞增殖下降越明显，呈剂量效应关系；同一浓度姜黄素处理不同时间后，随着处理时间的越长，HepG-2细胞增殖下降也越明显，呈时间效应关系；同样，Hoechst33258凋亡染色结果表明，不同浓度姜黄素处理相同时间后，随着处理浓度的越高，HepG-2