lupeol对肝细胞肝癌抑制作用及其机制的研究

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1、中文摘要第一章lupeol诱导肝细胞肝癌细胞凋亡并抑制体内肿瘤生长目的：研究lupeol体内外抗肝癌作用，从整体、细胞、分子水平探讨其作用机制：研究其与rTrail联合抗肝癌作用。方法：(1)采用MTT法研究luepol体外对HCC细胞系细胞增殖的抑制作用，采用人HCC细胞系SMMC7721细胞移植肿瘤裸鼠模型研究lupeol对体内肿瘤生长的抑制作用；(2)采用倒置显微镜、流式细胞术从形态学水平和生化角度检测luI',eol对HCC细胞凋亡的诱导和细胞周期的影响，采用westemblot方法分析其诱导凋亡的机制；(3)采用倒置显微镜

2、观察和流式细胞术从形态学水平和生化角度检测lupeol与rTrail联合对HCC细胞凋亡的诱导和细胞周期的影响，确定其联合作用是否为协同作用。结果：(1)体外抑瘤结果显示，lupeol能显著抑制人HCC细胞增殖，并且具有量效关系，作用48h的IC50为40p．mol／L．50I-tmol／L；体内模型抑瘤试验结果显示，lupeol能显著抑制人HCC细胞系SMMC7721细胞移植肿瘤的生长；(2)形态学倒置显微镜观察和流式细胞术结果显示，lupeol能诱导HCC细胞凋亡，阻滞细胞周期进程；westernblot结果显示lupeol作用

3、后使促凋亡蛋白caspase．3、cleaved．PARP活化上调，诱导胞内凋亡信号转导；(3)形态学倒置显微镜观察和流式细胞术结果显示，lupeol与rTrail联合能抑制HCC细胞增殖，诱导HCC细胞凋亡，但其作用只具有累加性，不具有协同性。结论：lupeol在体外能诱导HCC细胞凋亡，并能抑制体内肿瘤生长；但其与rTrail联合，只是具有相加作用，不具有协同性。关键词：lupeol；肝细胞肝癌：rTRAIL第二章Lupeol与P13K抑制剂S14161具有协同抗肝癌作用目的：研究提高lupeol抗肝癌治疗效果的方法；从细胞、基

4、因、蛋白水平探讨低浓度lupeol促进肿瘤生长的作用机制，通过联合P13K信号通路抑制剂，来协同提高lupeol抗肝癌治疗效果。生窒塑垂垫壁!!!型壁塑堕壁堡塑塑劁堡旦壁基塑!型堡塞方法：(1)对lupeol化学结构进行改造，采用MTT方法比较lupeol及其化学结构改造后衍生物对HCC细胞系细胞增殖的抑制作用；(2)采用MTT方法、流式细胞术方法对比lupeol及其衍生物H2在低浓度区间对HCC细胞增殖的抑制作用、对细胞凋亡的诱导作用，并采用RT-PCR、westernblot方法研究其分子机制；(3)采用MTT方法检测P13K抑

5、制剂S14161对HCC细胞增殖的抑制作用，选择合适浓度，联合低浓度lupeol，采用MTT方法检测联合用药对HCC细胞增殖的抑制作用，并采用westernblot方法研究其分子机制；(4)采用SMMC7721细胞移植肿瘤裸鼠模型，研究lupeol联合$14161对体内肿瘤生长的抑制作用。结果：(1)MTT结果显示，lupeol衍生物H1、T1、T2对HCC细胞增殖的抑制作用低于lupeol，lupeol对HCC细胞作用的IC50为401amol／L-509mol／L，H1、Tl、T2作用的ICs0分别为大于120I．tmol／L、

6、大约50}tmol／L、709mol／L一809mol／L；而衍生物H2对HCC细胞增殖的抑制作用优于lupeol，IC50小于309mol／L；(2)流式细胞术、RT-PCR、westernblot结果显示，低浓度lupeol不能诱导HCC细胞凋亡，对胞内促凋亡分子及P13K／Akt信号通路关键分子的表达水平作用微小，而低浓度H2能诱导HCC细胞凋亡，使胞内促凋亡分子表达上调及P13K／Akt信号通路关键分子表达下调：(3)MTT结果显示，S14161对HCC细胞作用的ICs0大约为4／amol／L，选取1l-tmol／L和3It

7、mol／L两个浓度，进行与lupeol的联合用药试验；MTT结果显示，lupeol与19mol／L和39mol／LS14161联合，协同促进了对HCC细胞增殖的抑制作用，低浓度区间更为明显；(4)westernblot结果显示，lupeol209mol／L联合S141611J．tmol／L和3I．tmol／L，协同下调了HCC胞内P13K／Akt信号通路的转导；(5)肿瘤移植裸鼠模型体内联合用药结果显示，lupeol与S14161协同抑制了体内肿瘤的生长。结论：低浓度lupeol促进肿瘤生长是由于激活了P13K／Akt通路。Lupe

8、ol和$14161单独应用对HCC细胞增殖均有抑制作用，低剂量联合有协同作用，联合用药提高了抗肝癌活性且无毒副作用。因而lupeol联合P13K信号通路抑制剂可能是更安全有效的抗肿瘤候选药物，值得进一步研发。关键词：lupeol；S1