茉莉酸甲酯对肝癌的抑制作用及其机理研究

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1、万方数据中图分类号UDCR602610博士学位论文学校代码!Q53呈密级公珏荣莉酸甲酯对肝癌的抑制作用及其机理研究EnlpiricalstudyofMethyljasmonateanti_hepatocellularcarcinomaefrectanditsmechanism作者学科研究学院(指导名：汪长发业：临床医学向：外科学所)：湘雅三医院师：蒋先镇教授论文答辩日期竺!二!!二}少答辩委员会主中南大学2013年10月姓专方氛教学位论文原创性声明恻万方数据本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导

2、师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：邀学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论

3、文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：』越日期：生年旦月三日导师签万方数据茉莉酸甲酯对肝癌的抑制作用及其机理研究摘要—1L—j一刚舌肝细胞性肝癌在我国的发病率明显高于西方国家，其恶性程度和死亡率都非常高，是严重威胁我国人民生命健康的疾病。全世界每年新增的肝癌病例，我国占到一半左右。目前肝癌治疗仍然以外科切除为主，但是治疗率低、复发性高、预后差，且由于肝癌被确诊时大多已处于晚

4、期失去了手术的最佳时期。因此，研究和应用有效的、可耐受的治疗肝癌的新药仍然是我国肝癌防治工作的重中之重。由于信号调控机制异常而导致肝癌细胞能“逃避"细胞凋亡，肝癌细胞强大的迁移和侵袭能力，以及对抗癌药物极易产生耐药性，是肝癌难以治愈的原因。从天然动植物中寻找低毒、高效的抗癌活性成分是近年来研究的热点之一。茉莉酸类是从茉莉中分离出来的一种类似于植物应激激素的水杨酸。有研究表明茉莉酸甲酯能治疗皮肤真菌感染、具有抗肿瘤作用及抗血管生成作用。研究证明茉莉酸甲酯可以抑制胃癌、肺癌、结肠癌、宫颈癌及黑色素瘤等

5、多种肿瘤细胞的增殖并诱导细胞凋亡，其作用机制可能与清除自由基，影响细胞周期蛋白(Cyclin)及细胞周期蛋白依赖性激酶(Cycl协．dependenil(inase，CDK)，影响P53、Bcl．2家族、caspase活性，影响与肿瘤发生密切相关的细胞信号传导通路等。本研究通过三个方面对茉莉酸甲酯的抗癌活性及其可能机制进行了探讨。第一，研究了茉莉酸甲酯对HepG2、PLC／PI讧／5和Hep3B等六种肝癌细胞株生长增殖的影响，选择抑制作用最强的HepG2作为其茉莉酸甲酯抗癌作用机制研究的对象；第二

6、，探讨了茉莉酸甲酯对肝癌细胞迁移和血管生成能力的影响；第三，探讨了茉莉酸甲酯对肝癌顺铂化疗敏感性的影响及机制。1茉莉酸甲酯通过砧洄K和InTOR信号通路对肝癌细胞抑制作用的研究目的：观察茉莉酸甲酯对肝癌细胞的抑制作用，以及对细胞内Ⅱ万方数据—6山口K和mTOR信号通路的影响，探索茉莉酸甲酯抑制肝癌细胞生长增殖的机制。方法：SRB实验检测不同浓度茉莉酸甲酯对HepG2、PLC／PRF／5、Hep3B、HepG2．2．15、MahlaⅦ、SK-H印1等肝癌细胞株生长增殖的影响。流式细胞术检测细胞周期和

7、线粒体膜电位变化，RT-PCR和W．estemblot分别检测细胞内灿汩K和mTOR信号通路相关基因的mRNA和蛋白水平的表达。电镜下观察茉莉酸甲酯干预对细胞形态变化的影响。免疫沉淀法检测茉莉酸甲酯对HepG2细胞TSC2／TSCl复合物组装情况。结果：茉莉酸甲酯的抗癌效能次序是HepG2>HepG2．2．15>MahlaⅦ>PLC／PRF／5>SK-Hepl>Hep3B。H印G2细胞采用双胸腺嘧啶阻断同步后，茉莉酸甲酯彻底阻止了细胞周期进程，并随后诱导细胞凋亡。包括细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白

8、E、Cdk2和Cdk2在内的G1调节蛋白核移位减少和下调支持了这一结论。茉莉酸甲酯没有改变G1调节蛋白的mRNA表达水平，表明蛋白翻译受到抑制，但转录水平没收到影响。茉莉酸甲酯诱导组装TSCl／TSC2，并通过抑制包括mTOR(Ser2448)，p70S6K(耵1r421／Ser424和1h389)和4E．BPl(nlr37／Tl一6和Tllr70)等蛋白质磷酸化导致细胞蛋白质合成受阻。此外，茉莉酸甲酯干预引起肝癌细胞舢K活性升高。—6山但K抑制剂复合物C显著逆转茉莉酸甲酯干预效果