il-17对肝细胞肝癌的促进作用及机制研究

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1、IL-17对肝细胞肝癌的促进作用及机制研究中文摘要结果：（1）CD3+的T淋巴细胞是IL-17的主要来源；CD4+T细胞，CD8+T细胞以及γδT均能够分泌IL-17，而以分泌IL-17的γδT细胞数目最多；γδT细胞产生的IL-17占到所有IL-17+细胞的60%，同时其数量是Th17细胞的四倍多；分泌IL-17的γδT细胞呈现ROR-γt+CD27-CCR6+表型。（2）肝脏中存在所有6种γδT细胞亚群；流式检测表明Vγ4细胞亚群是产生IL-17的主要细胞，75%的分泌IL-17的γδT细胞是Vγ4亚群。（3）敲除了γδT细胞之后，肝细胞肝癌的生长受到了显著抑制；血清中

2、IL-17的水平明显下降；CD8+T细胞的抗肿瘤应答显著增强记忆性的CD8+T细胞显著增加，CD8+T细胞分泌的IFN-γ也显著增加。（4）剔除了Vγ4细胞之后，和WT小鼠比较肿瘤体积明显减小；肿瘤浸润的IL-17+γδT细胞数量显著减少了，但是Th17细胞的数量却没有变化；血清中IL-17的水平也显著下降；CD8+T细胞的抗肿瘤应答显著增强，记忆性的CD8+T细胞显著增加，CD8+T细胞分泌的IFN-γ也显著增加。（5）输注WT来源的Vγ4γδT细胞的TCRδ-/-小鼠其肿瘤体积与WT小鼠相比无差异，而输注IL-17-/-来源的Vγ4γδT细胞的TCRδ-/-小鼠其肿瘤体

3、积显著小于WT小鼠，也显著小于输注WT来源的Vγ4γδT细胞的TCRδ-/-小鼠；输注IL-17-/-来源的Vγ4γδT细胞的TCRδ-/-小鼠具有更强的抗肿瘤应答，记忆性的CD8+T细胞和CD8+T细胞分泌的IFN-γ显著增加。结论：肿瘤微环境中的IL-17的来源，不是获得性免疫的Th17细胞，而是固有免疫的Vγ4γδT细胞亚群。Vγ4γδT细胞来源的IL-17促进了肝细胞肝癌的发生发展。关键词：肿瘤微环境；IL-17；来源；Vγ4γδT细胞第三部分：IL-17促进肝细胞肝癌发展的机制研究目的：研究IL-17促进肝细胞肝癌发展的具体调控机制。方法：利用RT-PCR和流式细

4、胞术检测MDSCs细胞表面IL-17R的表达情况。Transwell实验检测IL-17对MDSCs的趋化作用。流式细胞术检测MDSCs细胞表面CXCR2和CXCR4的表达情况。RealtimePCR检测IL-17处理的肝癌细胞Hepa1-6趋化因子CCL2、CCL5、CCL7、CCL20、CXCL12和CXCL5的表达水平的变化。Transwell实验检测IL-17处理的肿瘤细胞的上清对MDSCs的趋化作用。给予荷瘤小鼠CXCR2的拮抗剂SB265610或CXCR4的拮抗剂AMD3100以及rmIL-17的联III中文摘要IL-17对肝细胞肝癌的促进作用及机制研究合处理，观

5、察CXCL5/CXCR2轴或者CXCL5/CXCR4轴在IL-17介导的体内MDSCs趋化中的作用。将MDSCs与OT-I来源的CD8+T细胞进行了共培养，并加入rmIL-17或者anti-IL-17，利用特异性的刺激（SIINFEKL）来观察IL-17是否可以增强MDSCs对CD8+T细胞的抑制作用。CFSE和3H-TdR检测MDSCs对CD8+T细胞增殖的影响。利用Gr-1抗体和吉西他滨剔除小鼠体内的MDSCs观察在体内情况下IL-17介导的MDSCs的增强抑制作用。将纯化的MDSCs与γδT细胞进行了共培养，利用流式和ELISA方法检测共培养体系中γδT细胞分泌IL-

6、17的水平。在共培养体系中加入IL-1β和IL-23的中和抗体研究MDSCs促进γδT细胞产生IL-17的机制。在MDSCs与γδT细胞共培养体系中加入了外源的rmIL-17和IL-17的中和抗体，研究IL-17对MDSCs诱导γδT细胞分泌IL-17的增强效果。结果：（1）流式细胞术和RT-PCR的方法检测发现MDSCs表达IL-17R，但是体外趋化实验表明IL-17不能直接诱导MDSCs迁移。（2）MDSCs表达CXCR2和CXCR4这两种趋化因子受体；IL-17处理后的肿瘤细胞可以显著上调CCL2、CCL5、CCL7、CCL20、CXCL12和CXCL5的表达；但是检

7、测肿瘤微环境中这些趋化因子的表达水平后发现，只有CXCL5具有明显的上调；Transwell实验表明，IL-17处理后的肿瘤细胞上清可以显著促进MDSCs的迁移，且具有剂量依赖性，当加入anti-IL-17或者CXCR2的拮抗剂SB265610后可以显著抑制这一趋化作用。（3）给予rmIL-17的荷瘤小鼠经CXCR2的拮抗剂SB265610处理后肿瘤显著减小，肿瘤局部的MDSCs数量也显著降低，机体CD8+T细胞的抗肿瘤免疫应答也随着MDSCs的减少而显著增强。（4）CFSE和3H-TdR实验均表明IL-17可以增