小白菊内酯及大黄素抑制肠腺癌细胞增殖作用机制的实验研究

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1、分类号：R543.5单位代码：10159密级：公开学号：200617211博士学位论文中文题目：小白菊内酯及大黄素抑制肠腺癌细胞增殖作用机制的实验研究英文题目：Experimentalstudyonthemechanismofemodinandparthenolideinhibitingproliferationofintestinaladenocarcinomacells论文作者：马乾章指导教师：李岩教授学科专业：内科学完成时间：2018年10月中国医科大学博士学位论文小白菊内酯及小大黄素抑制肠腺癌细胞增殖作用机

2、制的实验研究Experimentalstudyonthemechanismofemodinandparthenolideinhibitingproliferationofintestinaladenocarcinomacells论文作者马乾章指导教师李岩教授申请学位医学博士培养单位第二临床学院一级学科临床医学二级学科内科学研究方向内科学消化论文起止时间2009年3月—2018年10月论文完成时间2018年10月中国医科大学（辽宁）2018年10月屮ＷｌｉＨ彳大ｆ消士学位论文中国医科大学学位论文独创性声明私

3、人郑遒珣明：木论文妃我个人在＃邮指导Ｆ独化进行的研宄Ｘ作及収涔的研宂成果，论文中除加以标往的内容外，不乜贪其他人或机构ｄ经Ｉ发衣成撰Ｗ过的研宄成果？也不包含本人为获得其他，学位而使用过的成架；，１．付本研宄提供力献的其他个人和集体均ｄ在文中进行ｒ明确的说明并表承？完全意ｌ只到木声明的法怍结果谢息＂木人由本人承担ｕ论文作者签名：日期：年上月口／１中晒科大学学纖版权麵权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的原

4、件、复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人授权中国医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。论文作者签名指导教师签名：口期年。月日日熟夕义年日士中国医科大学博士学位论文摘要目的：近年来，新兴的化学生物学学科发展非常迅猛。该学科利用现有的数量庞大而且化学结构多样的小分子化合物库，针对研究者所需要的化合物的生物活性进行筛选，并以此为依据进行相关的作用机制研究。本研究所选药物为小白菊内酯和大黄素，二者是从天然植

5、物中提取的小分子化合物。其生物活性均具有明显的抗癌作用，尤其是肠腺癌，近年来的研究逐渐增多。因此，延续我们前期对小白菊内酯和大黄素抗肠腺癌生物活性的研究，本课题采用体外实验的方式，对小白菊内酯诱导HCT-8/VCR细胞凋亡和耐药逆转作用机制靶点，以及大黄素诱导CACO-2细胞凋亡和调控PI3K/AKT信号通路的作用机制靶点进行了相关研究。通过对小白菊内酯和大黄素抗癌活性及作用机制的研究，为天然植物药物来源的小分子化合物抗癌作用提供基础，为天然植物药物用于临床肿瘤的治疗开拓市场。后续，我们将针对前期的研究成果，对两种

6、小分子化合物的生物活性与其结构的相关性进行分析，对于不理想的结构进行修饰，为新的抗癌小分子药物的研发做出贡献。研究方法：一、小白菊内酯诱导HCT-8/VCR细胞凋亡和耐药逆转作用研究1、MTT法检测PTL对HCT-8、HCT-8/VCR细胞的增殖抑制作用培养结肠癌细胞株HCT-8、HCT-8/VCR细胞株，加入96孔板，实验组加入不同浓度的PTL，对照组则加等量不含药物的培养液，处理12、24、48小时后，MTT法检测各孔吸光度（OD）值，计算细胞增殖抑制率。2、流式细胞仪（AnnexinV-FITC/PI染色）检

7、测PTL对HCT-8、HCT-8/VCR细胞凋亡的影响。消化收集对照组、PTL5µmol/L、10µmol/L、20µmol/L处理24h的HCT-8、HCT-8/VCR细胞，AnnexinV/FITC染色后，流式细胞仪检测，分析细胞凋亡百分比。3、吖啶橙（AO）/溴化乙锭（EB）荧光染色检测PTL对HCT-8、HCT-8/VCR细胞凋亡的影响。4取对数生长期HCT-8、HCT-8/VCR细胞，每孔1×10个/ml、2ml接种于6孔板中，孔内放入盖玻片。设小白菊内酯浓度5µmol/L、10µmol/L、20µmol

8、/L、及对照组共4组，每组3个复孔，每组给药24h后，取出盖玻片，固定、AO/EB染色、、封片，荧光显微镜观察，I中国医科大学博士学位论文每组分别计数，每次计数细胞300个，计算凋亡率。4、Western-blot法检测PTL对HCT-8、HCT-8/VCR细胞Bax、Bcl-2、蛋白表达的影响。收集对照组、PTL5µmol/L、10µmol/L、20µmo