德国小蠊过敏原Bla g 8基因的克隆及原核表达 毕业论文

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1、德国小蠊过敏原BLAG8基因的克隆及原核表达（《中国图书资料分类法》分类号）：R3单位代码：10660学号：07001001030贵阳医学院基础医学院2012届基础医学（生物技术方向）专业本科学位论文德国小蠊过敏原Blag8基因的克隆及原核表达学生：年级：07级专业：基础医学（医学生物技术）指导教师：实习单位：贵阳医学院生物学教研室2012年5月3日-42-德国小蠊过敏原BLAG8基因的克隆及原核表达目录摘要……………………………………………………………51.前言……………………………………………

2、………………62.材料与方法…………………………………………………72.1材料…………………………………………………………………72.1.1物种来源………………………………………………………72.1.2主要试剂…………………………………………………………72.1.3主要仪器…………………………………………………………82.1.4生物信息学分析软件…………………………………………92.2方法…………………………………………………………92.2.1部分序列的获取………………………………………………92

3、.2.2RACE获得全长序列……………………………………………92.2.2.15’RACEPCR引物的设计………………………………………92.2.2.2RACERNA的准备及逆转录获得第1链cDNA………………102.2.2.35’RACEPCR扩增及检测………………………………102.2.2.45’RACEPCR产物的纯化……………………………122.2.2.5大肠杆菌感受态细胞的制备…………………………122.2.2.6PMD18-T-Blag8重组质粒的连接转化…………………13-42-德国

4、小蠊过敏原BLAG8基因的克隆及原核表达2.2.2.7阳性克隆的筛选………………………………………………142.2.2.8菌液PCR验证及取菌液PCR测序…………………………142.2.2.9拼接获得全长序列及搜索其ORF…………………………142.2.3全长克隆………………………………………………………142.2.3.1全长引物的设计………………………………………………142.2.3.2PCR扩增及纯化………………………………………………142.2.3.3感受态细胞的制备………………………………

5、……………152.2.3.4连接及转化…………………………………………………152.2.3.5重组质粒的提取、转化表达菌BL21及阳性克隆的筛选……162.2.4全长DNA序列的生物信息学分析及功能预测………………172.2.5重组蛋白的表达与纯化………………………………………172.2.5.1IPTG诱导预表达…………………………………………182.2.5.2SDS-PAGE检测…………………………………………182.2.5.3重组蛋白可溶性的分析……………………………………192.2.5.4重

6、组蛋白表达条件的优化…………………………………192.2.5.5重组蛋白的大量表达…………………………………………202.2.5.6重组蛋白的纯化……………………………………………212.2.5.7表达产物的检测……………………………………………221.结果分析……………………………………………………………223.1PCR扩增反应……………………………………………………223.2重组质粒转化鉴定结果……………………………………………23-42-德国小蠊过敏原BLAG8基因的克隆及原核表达3.3Bl

7、ag8全长序列测序及生物信息学分析………………………243.3.1Blag8全长序列测序结果……………………………………243.3.2Blag8测序所得序列生物信息学分析………………………253.3.3Blag8变应原性的分析…………………………………………293.4重组蛋白的预表达结果……………………………………………313.5重组蛋白可溶性的分析结果………………………………………323.6重组蛋白的表达优化结果………………………………………333.6.1重组蛋白的时间诱导表达优化结果……………

8、………………333.6.2重组蛋白的IPTG浓度诱导表达优化结果………………………333.7重组蛋白的纯化……………………………………………………343．8重组蛋白纯化后的免疫印迹………………………………………351.讨论与结论…………………………………………………………36参考文献……………………………………………………39致谢………………………………………………………………41-42-德国小蠊过敏原BLAG8基因的克隆及原核表达德国小蠊过敏原Blag8基因的克隆及原核表达学生：