葡萄SAMS基因的克隆、原核表达及分析

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1、分类号：密级：学校代码：10165学号：2QlQl幽遣掌师耗犬学硕士学位论文⑨葡萄鲥胳基因的克作者姓名：学科、专业：研究方向：导师姓名：隆、原核表达及分析2013年04月学位论文独创性声明本人承诺：所呈交的学位论文是本人在导师指导下所取得的研究成果。论文中除特别加以标注和致谢的地方外，不包含他人和其他机构已经撰写或发表过的研究成果，其他同志的研究成果对本人的启示和所提供的帮助，均已在论文中做了明确的声明并表示谢意。学位论文作者签名：幽：学位论文版权的使用授权书本学位论文作者完全了解辽宁师范大学有关保留、使用学位论文的规定，及学校有权保留并向国家有关部门或机构送交复印件或磁盘，允许

2、论文被查阅和借阅。本文授权辽宁师范大学，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库并进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。保密的学位论文在解密后使用本授权书。学位论文储虢丝蛔指导刻雠：送坐鳢签名日期：2。l玉年r月割日辽宁师范大学硕士学位论文摘要植物在生长发育过程中，会遭受不同的生物和非生物胁迫，例如病虫害、干旱、伤害、低温，以及高盐等。作物在遭受逆境胁迫时，其正常生长发育会受到影响，作物质量和产率都会有所下降，直接或间接导致经济利润的下降。现在，人口不断增长以及环境恶化，自然灾害不断发生，作为具有重要经济

3、价值的水果一葡萄，其品种培育和科学栽培管理等问题越来越受到了人们的关注。因此，葡萄抗逆新品种的培育成为了葡萄栽培种抵御不良环境胁迫的最行之有效的方法之一。本研究以欧洲葡萄(所如vinifera)为研究材料，以欧洲葡萄中的S一腺苷甲硫氨酸合成酶(S-adenosylmethioninesynthetase，SAMS)为研究对象展开了研究，研究内容和结果如下：1．对葡萄基因组数据库(http：／／compbio．dfci．harvard．edu／tgi／cgi-bin／tgi／Blast／index．egi)进行检索分析，获得了5个包含有完整ORF区和保守结构域的VvSAMS基因，并

4、对其进行了初步的生物信息学分析。分析结果显示，这5个VvSAMS蛋白都包含有SAMS典型的N端结构域、中间结构域和C端结构域；且都不具有信号肽和跨膜结构域，都不是分泌蛋白，也不是膜蛋白；其二级结构主要由仅螺旋和随机卷曲组成。相似性分析结果显示，得到的这5个葡萄SAMS基因与拟南芥SAMS基因分别存在不同程度的相似性，这对于我们深入研究VvSAMS基因的结构以及功能等都具有重要理论参考价值。2．以欧洲葡萄叶片为材料，克隆得到两个含有完整开放阅读框(ORF)的VvSAMSl基因和阳‘蜘^么S．；基因。3．用SA、MeJA和创伤处理葡萄叶片，通过实时荧光定量PCR的方法，分析了VvSA

5、MSl基因的表达量的变化。分析结果显示，不同胁迫处理条件下，其相对表达量均发生了变化，并且呈现出一定的规律性。这表明VvSAMSl基因与植物抗逆性存在一定关系。4．成功构建了葡萄VvSAMSl基因的原核表达载体，并将重组子转入到大肠杆菌BL21中，利用IPTG对重组子进行诱导表达，实现异源表达，这对于我们深入研究VvSAMS基因表达的蛋白的功能打下了良好的基础。对欧洲葡萄中SAMS基因的克隆、功能分析以及生物分析等的研究，为了更深入研究VvSAMS基因的抗逆性机制以及功能等都提供了重要的理论依据和实验研究基础。关键词：葡萄；SAMS；生物信息学分析；原核表达；实时荧光定量PCR葡

6、萄．翻^艿基因的克隆、原核表达及分析Cloning，BioinformaticsAnalysisandProkaryoticExpressionofSAMSGenesin所廊viniferaAbstractIntheprocessofgrowthanddevelopment，plantoftenencountersbioticandabioticstressessuchaspests，disease，drought，injury，lowtemperatureandSOforth．Thoseadversitystresseswillaffectthegrowthanddevelop

7、mentofplant，．1eadingtodecreaseofproductionandquality．Incurrently，withtheincreasofpopulationanddegradationofenvironment，asanimportantfruitintheworld，grapeisfacingthestressproblemsinthecultivation．Therefore，cultivatingnewvarietyofgrapewhichwill