氯化钴对甲状腺乳头状癌npa细胞上皮间质转化的影响及其机制

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1、氯化钴对甲状腺乳头状癌NPA细胞上皮间质转化的影响及其机制贾朝莉，龙方懿，刘智敏，杨俊艳，刘小花，董超然，王妮（400016重庆，重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室，分子医学与肿瘤研究中心）[摘要]目的研究氯化钴（CoCl2）诱导的低氧对甲状腺乳头状癌NPA细胞上皮间质转化的影响，初步探讨HIF-1a在其中的机制。方法MTT检测CoCl2（50、100、150、200、250μmol/L）对细胞活力的影响，倒置显微镜观察低氧（150μmol/L的CoCl2分别作用0、12、24、48h）对细胞形

2、态的影响，Westernblot检测低氧（150μmol/L的CoCl2分别作用0、3、6、12、24h）对HIF-1a、E-cadherin和Vimentin表达的影响，Transwell法检测低氧（150μmol/L的CoCl2分别作用0、6h）对细胞侵袭、转移的影响，用免疫荧光对HIF-1a蛋白进行亚细胞定位。结果低氧模拟剂CoCl2可抑制NPA细胞活力。随着CoCl2低氧处理时间的延长，NPA细胞逐渐获得间质细胞的形态特征，HIF-1a、Vimentin表达在0～6h间逐渐增加，随后开始下降，E-ca

3、dherin表达持续降低，低氧0h与6h相比各蛋白表达均具有统计学差异(P＜0.01)。低氧组侵袭、转移细胞数目较对照组明显增加(P＜0.01)，同时低氧组细胞HIF-1a发生核转位。结论CoCl2模拟化学性低氧可促进NPA细胞上皮间质转化及侵袭、转移，其分子机制可能涉及HIF-1a介导的信号通路对E-cadherin、Vimentin基因表达的调控。[关键词]低氧诱导因子-1a；上皮间质转化；甲状腺乳头状癌[中图法分类号]R736.1；R364.4；R730.2[文献标志码]AEffectofCoCl2on

4、epithelial-mesenchymaltransitionofhumanpapillarythyroidcarcinomacellsJiaChaoli，LongFangyi，LiuZhimin，YangJunyan，LiuXiaohua，DongChaoran，WangNi　（DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，InstituteofMolecularMedicineandCancer，CollegeofBasicMedicalSciences，Cho

5、ngqingMedicalUniversity，Chongqing，400016，China）[Abstract]ObjectiveTodeterminetheeffectandmechanismofHIF-1aonepithelial-mesenchymaltransitioninhumanpapillarythyroidcarcinoma.MethodsCellullarvitalitywasevaluatedbyMTT.MorphologicalchangesofNPAcellswereobserved

6、underinvertedmicroscope.TheexpressionlevelsofHIF-1a、E-cadherinandVimentinineachgroupofNPAcellswereanalyzedbyWesternblotting.Theinvasionandmetastasispotentialofeachgroupwasdetectedbytranswellassay.ImmunofluorescencewasusedtodetectwhetherHIF-1atransfersintheN

7、PAcellnucleus.ResultsNPAcellsvitalitywassuppressedbyCoCl2.NPAcellsinlowoxygengroupgraduallyacquiredthemorphologicalcharacteristicsofmesenchymalcells.TheexpressionlevelsofHIF-1awererisedwiththeincreaseofhypoxiatime.TheexpressionofE-cadherinwasdown-regulatedi

8、nlowoxygenconditions,whiletheexpressionofVimentinwasup-regulated.HIF-1atranslocatedtothenucleusinhypoxiagroup,whileitdidn’toccurinnormoxiagroup.ThecellnumbersofhypoxiagroupthatpenetratedthroughtheTrans