bufalin对食管癌中fak活化和上皮间质转化的影响

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1、授予单位代码10089学号或申请号2(〗122294HebeiMedicalUniversity硕士学位论文学学位Bufalin对食管癌中FAK活化和上皮间质转化的影响研究生：刘雪姣导师：刘月平教授王小玲教授专业：病理学与病理生理学二级学院：第四医院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相

2、关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。r:研究生签名為智表导师签章二级学院f页•:盖章:河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：导师签章:年月日目录中文摘要………………………………………………………………………1英文摘要……

3、………………………………………………………………6英文缩写……………………………………………………………………12研究论文Bufalin对食管癌中FAK活化和上皮间质转化的影响前言……………………………………………………………………13材料与方法…………………………………………………………….14结果……………………………………………………………………27附图……………………………………………………………………32附表……………………………………………………………………42讨论……………………………

4、………………………………………48结论……………………………………………………………………50参考文献………………………………………………………………50综述黏着斑激酶与肿瘤的研究进展………………………………54致谢………………………………………………………………………65个人简历…………………………………………………………………66中文摘要Bufalin对食管癌中FAK活化和上皮间质转化的影响摘要食管癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，早期的转移及侵袭是食管癌高死亡率的主要原因。黏着斑激酶（FAK），是

5、一个125kD的非受体型酪氨酸激酶，多项研究中均证实，FAK在食管癌的发生发展中扮演着重要的角色。近年来，FAK在肿瘤干细胞与肿瘤微环境以及上皮间质转化（EMT）中的作用逐渐成为研究的热点。上皮间质转化（EMT）是指上皮细胞受到细胞外因子刺激后向间质细胞转化的过程，细胞间连接减少，同时与细胞周围基质粘连减少，细胞骨架重构，细胞运动能力增加。蟾蜍灵（Bufalin）是从传统中药蟾酥中提取的具有抗肿瘤作用的洋地黄类物质。但是Bufalin在食管癌中的具体作用机制仍然不明确。本实验室前期对Bufalin在

6、食管癌中Ras/Raf/MEK/ERK信号转导通路中的作用作了大量实验研究，发现Bufalin可以通过下调ERK的磷酸化水平，发挥抗肿瘤作用。为了更好的了解食管癌发生发展的具体机制，本实验通过体内体外实验，研究了Bufalin对食管癌中FAK活化和上皮间质转化的影响，从而进一步探讨Bufalin在食管癌中抗肿瘤的作用机制。目的：探讨Bufalin对食管癌中FAK活化和上皮间质转化的影响。方法：1RT-PCR方法检测不同浓度Bufalin对食管鳞状细胞癌ECA109细胞FAK、E-Cadherin、V

7、immRNA表达的影响。2WesternBlot方法检测不同浓度Bufalin对ECA109细胞FAK活化水平及FAK、E-Cadherin、Vim蛋白表达的影响。3采用划痕愈合和Transwell小室实验检测不同浓度Bufalin对ECA109细胞迁移与侵袭能力的影响。4建立36只人食管鳞状细胞癌ECA109细胞裸鼠原位移植瘤模型，随机分为6组，即模型组、Bufalin低剂量组（0.5mg/kg，BL）、Bufalin中剂量组（1mg/kg，BM）、Bufalin高剂量组（1.5mg/kg，BH）

8、、PF562271组（FAK抑制剂）、高剂量Bufalin与PF562271组联合应用组（BP），1中文摘要持续腹腔注射药物30天。用药期间观察裸鼠饮食和精神状态变化，记录裸鼠体重和肿瘤大小数据。5用药结束后处死全部裸鼠，测量肿瘤大小并计算肿瘤抑制率。6HE染色检测各组裸鼠移植瘤肿瘤组织镜下表现。7Realtime-PCR检测各组裸鼠移植瘤中FAK、E-Cadherin、VimmRNA的表达。8免疫组化法检测各组裸鼠移植瘤中FAK活化水平及FAK、E-Cadherin