经典wnt信号对结肠癌细胞上皮—间质转化的影响

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1、授予单位代码10459学号或申请号201212262799密级公开硕士学位论文经典Wnt信号对结肠癌细胞上皮-间质转化的影响作者姓名：赵纪华导师姓名：邢莹教授学科门类：理学专业名称：神经生物学培养院系：基础医学院完成时间：2015年5月AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterEffectofWntsignalingonepithelial-mesenchymaltransitionofcoloncancerMasterdegreeCandidate:JihuaZhaoSupervisor:Prof.YingXingNeu

2、robiologyCollegeofBasicMedicalSciencesZhengzhouUniversityMay2015原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中己经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：I,乙年>//年f月4曰学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交

3、论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。曰学位论文作者：“紀年日期：•//年/月摘要经典Wnt信号对结肠癌细胞上皮-间质转化的影响硕士研究生：赵纪华导师：邢莹教授郑州大学基础医学院生理学与神经生物学教研室河南郑州450001摘要背景介绍Wnt基因广泛存在于无脊椎动物和脊椎动物，并且在不同物种具有高度的保守性。经典Wnt信号通路参与多种生理

4、和病理机制，调控细胞增殖、分化、细胞极性、迁移、凋亡等一系列重要过程，尤其在各种干细胞、肿瘤细胞等生命活动活跃的细胞中发挥关键作用。迄今研究表明，经典Wnt信号功能失调与多种癌症的发病机制密切相关，不仅参与恶性肿瘤的发生，而且促进其发展和转移，包括乳腺癌、胃癌、食管癌、结肠癌、肝癌、肺癌、黑色素瘤等。上皮-间质转化(epithelialmesenchymaltransition,EMT)指上皮样细胞在特定的生理或病理环境中向间质样细胞转变分化的现象，其逆向过程称为间质-上皮转化（mesenchymalepithelialtransition,MET）。生理性EMT/MET多见于胚胎发育和组织愈

5、合修复，而病理性EMT主要参与某些组织的纤维化及恶性肿瘤细胞的转移，是肿瘤细胞局部浸润和转移的关键步骤。在EMT过程中，上皮起源的细胞失去其上皮样表型并逐渐获得间质样细胞表型，即细胞极性消失，细胞间的紧密连接减少，黏附能力降低，单层细胞结构不能维持，细胞的迁移、游走能力增加，从而表现出侵袭转移能力的增强。EMT细胞的典型分子表型变化主要是上皮细胞标志物E型钙黏蛋白(epithelium-cadherin,E-cad)等表达降低，而N型钙黏蛋白(N-cadherin,N-cad)、波形蛋白(Vimentin,Vim)等间质细胞标志物表达升高；且多种转录因子也相应呈现一系列变化。EMT受多种分子信

6、号通路调控，目前研究表明，经典Wnt信号通路（又称Wnt/β-catenin通路）参与某些生理和病理的EMT/MET的调节。如在小鼠肾小管I摘要发育中，敲除Wnt基因可有效阻断间质样细胞迁移和组织局部肾小管上皮细胞的形成，采用基因敲除的方法干扰Wnt/β-catenin信号通路，显著影响EMT介导的肿瘤转移病灶的发生，显示了该通路在肿瘤转移中的重要意义，提示针对Wnt/β-catenin信号通路的靶向性治疗具有阻断肿瘤转移的潜在意义。目前已证实Wnt/β-catenin信号通路失调是结肠癌发病的重要诱因，该通路是否促进结肠癌的浸润与转移尚需进一步研究。目的本实验选用体外培养的结肠癌细胞系HCT

7、116细胞作为实验对象，利用基因重组蛋白Dkk1和Wnt3a分别抑制和激活Wnt/β-catenin信号通路，采用细胞划痕实验和实时荧光定量聚合酶链反应（polimerasechainreaction,PCR），观察Wnt/β-catenin信号通路活性改变对细胞迁移的影响以及对EMT特征性分子和相关转录调控因子基因表达的影响，从而确定Wnt/β-catenin信号通路对结肠癌细胞EMT的调控作用