snail基因诱导绒癌细胞上皮—间质转化的研究

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1、授予单位代码10089学号或申请号20123159HebeiMedicalUniversity硕士学位论文专业学位Snail基因诱导绒癌细胞上皮-间质转化的研究研究生：马晓琳导师：庞义存教授专业：妇产科学二级学院：第三医院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公幵和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产

2、权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。研究生签名师签章级学院领导盖章：女年^月‘河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成杲，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名:目录中文摘要…………………………………………………………………1英文摘要…………………………………………………………………5英文缩写…………………………………………………………………10研究论文Snail基因诱导绒癌细胞上皮-间

3、质转化的研究前言…………………………………………………………………11材料与方法…………………………………………………………11结果…………………………………………………………………23附图…………………………………………………………………25附表…………………………………………………………………28讨论…………………………………………………………………30结论…………………………………………………………………33参考文献……………………………………………………………34综述Snail基因与妇科恶性肿瘤上皮-间质转化的研究……………37致谢………

4、………………………………………………………………44个人简历…………………………………………………………………45中文摘要Snail基因诱导绒癌细胞上皮-间质转化的研究摘要目的：绒毛膜癌(choriocarcinoma，CC)，简称绒癌，是一种生长迅速的高度恶性肿瘤，以血行播散、转移早而广泛且对化疗敏感为主要特征。其发病机制至今仍尚不清楚。绒癌侵袭转移的发生及对化疗药物产生耐药性是造成患者死亡的主要因素。因此，如何抑制肿瘤细胞侵袭转移成为研究热点。上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)，是指在特

5、定的生理或病理情况下，具有极性的上皮表型细胞发生细胞骨架重塑现象，侵袭及迁移能力增强，上皮细胞标志物E-cadherin及间质细胞标志物N-cadherin的表达改变，转化为具有活动能力的间质表型细胞的过程。越来越多的研究表明，EMT不仅是哺乳动物胚胎发育及器官形成的基础过程，还与多种上皮性恶性肿瘤的局部浸润以及远处转移密切相关。因此，进一步了解EMT分子调控机制及肿瘤发生发展机制，再通过各种技术干扰EMT的过程，有望为绒癌的治疗提供新方向。Snail基因首先在果蝇中发现，随后在多种脊椎动物包括人类中相继识别出Snail及其同源组织。Snail及

6、其同源组织属于SNAIL家族，包括Snail、Slug、S1P1等。在对多种肿瘤的研究中发现，Snail基因通过抑制E-cadherin表达及促使N-cadherin表达，诱导EMT的发生，肿瘤细胞迁移、侵袭及转移能力增强。然而，Snail基因与绒癌细胞EMT的关系罕见报道。本实验通过体外培养绒癌JEG-3细胞，以转染Snail基因作为处理因素，观察细胞形态、迁移能力及EMT分子标记物的表达，旨在研究Snail基因在绒癌发生发展中的作用，并对其机制进行探讨，以期为绒癌的治疗提供新思路及理论依据。方法：1培养人绒毛膜癌JEG-3细胞株；2实验分组：

7、①实验组，应用Lipofectamine™2000脂质体转染试剂转染pEGFP-N1-Snail质粒；②阴性对照组，转染空白质粒；③脂质体对照组，转染Lipofectamine™2000脂质体转染试剂；④空白对照组，无任何处理；1中文摘要3倒置相差显微镜：观察各组JEG-3细胞形态的变化；4细胞划痕试验：应用划痕试验评估各组JEG-3细胞的迁移能力；5Real-timeqPCR：检测各组JEG-3细胞转染48小时后Snail-mRNA的表达水平；6Westernblotting：检测各组JEG-3细胞中上皮细胞标记物E-cadh-erin、间质细

8、胞标记物N-cadherin的表达情况；7应用SPSS13.0统计软件进行统计学分析，数据以均数±标准差(±s)表示，多组间均数比较