ESCRT系统成员CHMP3对A549细胞上皮—间质转化过程的影响及其分子机制的研究

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1、分类号：Q28单位代码：10159密级：公开学号：201520017硕士学位论文中文题目：ESCRT系统成员CHMP3对A549细胞上皮-间质转化过程的影响及其分子机制的研究英文题目：EffectofCHMP3,amemberofESCRTsystem,ontheepithelial-mesenchymaltransitionofA549cellanditsmolecularmechanism论文作者：连博文指导教师：陈澄学科专业：细胞生物学完成时间：2018年3月中国医科大学硕士学位论文ESCRT系统成员CHMP3对A549细胞上皮-间质转化过程的

2、影响及其分子机制的研究EffectofCHMP3,amemberofESCRTsystem,ontheepithelial-mesenchymaltransitionofA549cellanditsmolecularmechanism论文作者连博文指导教师陈澄副教授申请学位理学硕士培养单位基础医学院一级学科基础医学二级学科细胞生物学研究方向肺部发育与肺部疾病论文起止时间2016年3月—2018年3月论文完成时间2018年5月中国医科大学（辽宁）2018年5月IIIII中国医科大学硕士学位论文摘要目的：特发性肺纤维化（idiopathicpulmona

3、ryfibrosis，IPF）是一种常见的慢性、进行性和致死性的肺部疾病，其特征是纤维母细胞和成纤维细胞的异常增生和重构。IPF的病因尚不明确，目前被广泛接受的观点是，特发性肺纤维化是由于受损的肺泡上皮细胞异常激活，引起成纤维细胞增生、纤维母细胞募集和上皮-间质转化，进而导致细胞外基质的沉积，损伤修复异常和肺部结构重构。针对IPF现阶段尚无有效的治疗手段，因此阐明其发生、发展过程对于IPF的预防和治疗具有重要意义。上皮-间质转化（epithelial-mesenchymaltransition,EMT），是指上皮细胞失去其表型转而获得间质细胞表型的过

4、程。该过程中伴随着细胞极性的消失、胞间连接的解聚和细胞骨架的重排。在正常生理状态下，EMT参与胚胎发生、器官发育、创伤修复和组织重构等一系列重要的生命进程。在病理条件下，EMT也可以被异常激活，增强细胞的增殖和转移能力，这点在癌症的发生和发展过程中尤为显著。近期研究表明，IPF疾病进程中EMT扮演着重要的角色，受损肺泡上皮细胞EMT可能是间质细胞的起源之一。内体分拣转运复合体（endosomalsortingcomplexrequiredfortransport,ESCRT）是一种能够识别并分拣泛素化蛋白的多亚基复合体。其成员包括：ESCRT-0、E

5、SCRT-Ⅰ、ESCRT-Ⅱ、ESCRT-Ⅲ和Vps4-Vtal辅助因子家族，广泛参与胞质分裂、病毒出芽、自体内吞、细胞自噬、胞膜损伤修复以及胞内信号转导等诸多细胞进程。CHMP3属于ESCRT-Ⅲ家族成员，与其它三个核心亚基（Vps20、Snf7和Vps2）以及三个调节亚基（Did2、Vps60和Ist1）共同组成ESCRT-Ⅲ亚复合体，在多泡体（multivesicularbody,MVB）生物合成中共同发挥作用。研究表明，ESCRT系统参与调控受体信号通路，维持上皮细胞极性，抑制肿瘤细胞转移。这些现象与细胞EMT进程息息相关，我们大胆推测ESC

6、RT系统可能在肺泡上皮细胞EMT进程中扮演某种角色，并设计实验进行验证。本课题使用TGF-β诱导人肺腺癌细胞系A549细胞的方法，构建了肺泡上皮细胞EMT模型，检测了E-cadherin、Vimentin和α-SMA在诱导前后表达量的变化，I中国医科大学硕士学位论文以及肺泡上皮细胞EMT进程中ESCRT系统成员CHMP3的表达趋势。分别采用多泡体生成抑制剂U18666A和构建过表达CHMP3A549稳转细胞系的方法，初步探究了CHMP3对A549细胞EMT进程的影响及其潜在的分子机制。研究方法：1、本研究使用TGF-β诱导A549细胞构建肺泡上皮细胞

7、EMT模型。分别应用倒置显微镜观察诱导前后细胞形态变化；WesternBlot技术检测诱导前后相关上皮分子标志物E-cadherin和间质标志物Vimentin表达量的变化；免疫细胞荧光染色检测诱导前后E-cadherin、Vimentin和α-SMA表达量的变化，评估造模效率。应用WesternBlot技术检测诱导前后CHMP3表达量的变化，观察ESCRT系统在细胞EMT过程中的应答。2、我们构建了过表达CHMP3的A549稳转细胞系，使用TGF-β分别诱导A549细胞和过表达CHMP3的A549稳转细胞系，应用WesternBlot技术检测各组诱

8、导前后E-cadherin和Vimentin表达量的变化，评估过表达CHMP3对肺泡上皮细胞EMT进程的影响