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1、人小细胞肺癌细胞H446Snail基因表达及其在顺铂耐药中的作用况里杉,周向东(400038重庆,第三军医大学西南医院呼吸内科)[摘要] 目的观察锌指转录因子snail在耐顺铂（cisplatin,CDDP）的人小细胞肺癌(smallcelllungcancer,SCLC)H446/CDDP细胞中的表达情况，探讨snail表达在人SCLC顺铂耐药中的作用。方法 培养H446细胞系和H446/CDDP细胞系，采用MTT法检测H446/CDDP的耐药指数；分别提取人SCLC顺铂耐药细胞H446/CDDP及其亲代细胞H446的mRNA及总蛋白，应用sybgree
2、n实时荧光RT-PCR、western-blot方法检测snailmRNA及蛋白表达水平。结果 H446/CDDP细胞snail蛋白及mRNA表达水平较H446细胞显著性升高。结论 SCLC的顺铂耐药性可能与snail表达水平增高有关。 [关键词] 人小细胞肺癌；顺铂耐药；snail；realtimeRT-PCR；western-blot[中图法分类号]R734.2[文献标志码]AExpressionofSnailinhumansmall-celllungcancercellH446anditsroleincisplatinresistanceKuang
3、Lisha1,ZhouXiangdong1(1DepartmentofRespiratoryDiseases,southwestHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing,400038,China)[Abstract] Objective weobservedtheexpressionofzincfingertranscriptionfactorSnailinthehumancisplatinresistancesmall-celllungcancer(SCLC)celllineH446/CDDP,s
4、oastostudyitsroleinhumanSCLCcisplatinresistance.Methods H446andH446/CDDPcelllineswereCultured,cisplatinresistanceindexesweremeasuredbymethyltetrazolium(MTT)assay.mRNAandtotalproteinarerespectivelyextractedfromH446andH446/CDDP.ExpressionlevelofsnailinmRNAandproteinlevelwasdetectedb
5、yrealtimeRT-PCRandwestern-blot.Results ThesnailexpressionofH446/CDDPcellsweresignificantlyhigherthanH446cellsbothinproteinandmRNAlevel.ConclusionTheciaplatinresistanceinhumanSCLCmayberelevanttothehighexpressionlevelofsnail.[Keywords] humansmallcelllungcancer;cisplatinresistance;sn
6、ail；realtimeRT-PCR；western-blotSupportedbytheNationalBasicResearchProgramofChina(973Program，2010CB529402)．Correspondingauthor:ZhouXiangdong,E-mail:xiangdongzhou@126.comSCLC易发生顺铂耐药，其机制目前尚不完全清楚，可能与凋亡、DNA修复异常、细胞内药物异常积累等多种因素相关[1]。Snail(锌指转录因子)是一种抑制型转录因子，通过直接抑制钙黏蛋白E(E-cadherin)的表达触发上皮-
7、间充质转化(epithelialtomesenchymaltransition,EMT)的发生，进而赋予上皮源性肿瘤细胞运动和侵袭能力[2,3]。在肺腺癌细胞系A549的研究中发现沉默Snail的表达能够恢复细胞对顺铂的敏感性[4,5]，而在SCLC尚缺乏相关方面的研究。因此，本研究拟从EMT的关键因子snail入手,研究人SCLC顺铂耐药性的获得与snail表达水平之间的关系,为逆转其耐药寻求新的途径。[基金项目] 国家重点基础研究发展计划（973计划，2010CB529402）[通信作者] 周向东,E-mai:xiangdongzhou@126.com
8、1 材料与方法1.1细胞株及主要试剂人SCLC细胞系H446（简称
