survivin及 bcl2基因表达在胃癌细胞株mgc803顺铂耐药中的作用

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1、survivin及bcl2基因表达在胃癌细胞株MGC803顺铂耐药中的作用【摘要】目的探讨胃癌细胞株MGC803对顺铂（CDDP）耐药产生的有关机制。方法观察不同浓度CDDP(0.1、1.0、10.0mg/L)对MGC803细胞增殖、凋亡及抗凋亡基因survivin，bcl2mRNA表达的影响，用MTT法检测细胞生长抑制率；荧光染色检测细胞凋亡率；流式细胞仪测定细胞周期的变化；RTPCR检测survivin、bcl2mRNA的表达。结果10mg/L的CDDP对MGC803细胞有较强的抑制增殖、促进凋亡作用，而0.1、1.0mg/L的CDDP干预24h后，其抑制细胞增殖

2、，促进细胞凋亡的作用逐渐消失；CDDP作用于细胞48h后，细胞S期增加，G2/M期下降；MGC803细胞在1.0mg/L的CDDP作用下，survivinmRNA表达自24h后逐渐增高，bcl2mRNA表达逐渐下降(P＜0.05)。结论CDDP可干扰MGC803细胞周期，但该细胞对低浓度CDDP易于产生耐药，survivinmRNA表达增高可能是MGC803细胞对CDDP产生耐药原因之一。【关键词】胃癌细胞株顺铂耐药细胞凋亡survivinbcl2胃癌是我国常见的恶性肿瘤，其死亡率居各类恶性肿瘤之首，化疗作为胃癌的重要治疗手段之一，其疗效仍不令人满意，原因主要与癌细胞耐药

3、有关。为此，本实验参照2.4RTPCR检测CDDP对胃癌细胞survivin、bcl2mRNA表达的影响RTPCR检测survivin、bcl2mRNA表达的变化(图2、3)、凝胶成像分析仪分析结果(表4)发现，MGC803细胞在低浓度（1.0mg/L）CDDP作用下，survivinmRNA在24、48、72h后表达持续增强，72h后其表达接近于对照组的3倍。而bcl2mRNA在干预12、24、84、72h表达逐渐减弱。表4半定量RTPCR检测CDDP对MGC803细胞　　3讨论临床上由于大剂量化疗药物毒副作用大，患者不能耐受，小剂量极易产生耐药等原因，极大地影

4、响了其疗效。积极探索肿瘤细胞对化疗药物的耐药机制，克服肿瘤细胞耐药的产生，是胃癌非手术治疗急需解决的问题之一。survivin广泛表达于机体胚胎及恶性肿瘤组织[4,5]，它在胃癌病理组织中表达高达82%[6]，而在正常组织、终末分化组织中表达阴性，同时survivin表达情况与肿瘤组织的转移、浸润及化学耐药等恶性生物学行为密切有关[7]，其作用机制与IAP家族的其他蛋白相似，它通过抑制caspase3和7酶原的活性，从而抑制细胞凋亡，此外，survivin还参与了细胞的有丝分裂，促进细胞增殖，研究发现，应用survivin反意寡核苷酸抑制正常和肿瘤细胞survivin的表达

5、，结果在细胞凋亡增加的同时，多倍体产生增多，软琼脂培养基中的集落减少[8]，转染survivin基因的293细胞增殖速度加快[9]，表达磷酸化缺陷survivin突变体可以增加人类黑色素瘤细胞的凋亡，增强顺铂诱导的细胞死亡[10]。bcl2是较早发现的、重要的细胞凋亡抑制基因，在多种恶性肿瘤组织过度表达，它通过阻止钙离子从内质网向胞浆释放，使依赖钙离子的核酸内切酶活性降低，抑制氧化自由基的产生等阻断细胞凋亡，增加肿瘤播散侵袭能力。在本实验中发现，MGC803细胞存在凋亡抑制基因survivin和bcl2mRNA的表达。CDDP可使肿瘤细胞周期发生改变，从而诱导周期特异性细

6、胞凋亡[11，12]，我们的研究发现，MGC803细胞经CDDP处理后，细胞S期比例增加，G2/M期下降，说明细胞受阻于S期，不能进入G2/M期，这与有关对食管癌的研究报道相一致[13]。然而其临床疗效却不十分乐观，主要原因与肿瘤细胞的耐药有关，结果表明，大剂量CDDP（10.0mg/L）可抑制胃癌细胞株MGC803增殖、诱导凋亡，并具有较好的时效相关性，但该浓度已远远大于临床用药剂量，临床最大用药剂量的血药峰值浓度为2mg/L[14]，而接近这一浓度的低浓度组（0.1mg/L,1.0mg/L）对此胃癌细胞系作用较弱，药物干预24小时后，细胞凋亡率几乎不再发生改变，对细胞增殖

7、抑制作用也逐渐减弱，表明MGC803细胞对低浓度CDDP极易产生耐药，其机制目前尚不十分清楚。除了肿瘤细胞能过度表达mdrl编码的P糖蛋白,增加药物排出外，还在于肿瘤细胞能抵抗药物诱导的凋亡。有研究认为，化疗药物接触肿瘤细胞后可诱导肿瘤细胞COX2表达增加,进而诱导抗凋亡基因bcl2的表达[15]，此外，新近研究还发现，CDDP可诱导凋亡抑制基因家族（IAP）的新成员survivin的表达增加[16，17]。本研究发现，MGC803细胞经低浓度（1mg/L）CDDP作用后，survivinmRNA于