靶向mtor增敏顺铂对胃癌耐药细胞株sgc79012fddp的作用

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1、徐州医学院硕士学位论文靶向mTOR增敏顺铂对胃癌耐药细胞株SGC7901／DDP的作用中文摘要目的靶向mTOR／p70S6K基因干扰增敏顺铂对胃癌耐药细胞株SGC7901／DDP的作用，并探讨其相关作用机制。方法胃癌SGC7901／DDP细胞培养于含10％胎牛血清、500ng／ml顺铂(cisplatin，DDP)、100U／ml青霉素和100U／ml链霉素的RPMll640培养液中，1．给予转染荧光标记siRNA(FAM．siRNA)6h后，荧光显微镜检测筛选细胞转染最佳浓度，以最佳浓度进行后

2、续实验；p70S6K-siRNA转染(40pmol／p1)、DDP(2．5mg／L)作用SGC790I／DDP细胞后：2．MTT法检测各组细胞24h、48h、72h增殖情况；药物作用细胞48h后：3．HE染色观察各组细胞形态学变化；4．RT-PCR检测各组细胞GST、MRPl、survivinmRNA的表达水平：5．免疫细胞化学染色及Western—blot检测各组细胞中survivin、p-JNK、P—gP、MRPl蛋白的表达情况：6．检测各组细胞内GSH含量和GST活力。结果1．不同浓度荧光

3、标记的siRNA(siRNA朋旨质体(pmol／t．t1)：20，40，60，80组)转染6h后均可成功转入SGC7901／DDP细胞，在荧光显微镜下可见绿色荧光散在分布于各组细胞质中，其中40pmol／pl组转染率最高(P<0．05)：2．2．5mg／LDDP单独应用对SGC7901／DDP细胞增殖无抑制作用，与对照组相比差异无统计学意义(尸>0．05)。p70S6K．siRNA转染SGC7901／DDP细胞后，细胞增殖受到不同程度抑制，与对照组相比差异有统计学意义(P

4、DP作用，药物对细胞增殖的抑制更明显，与p70S6K．siRNA转染组相比，差异均有统计!学意义(JP

5、有统计学意义(P0．05)；细胞经p70S6K．siRNA转染及转染联合DDP后，GST、survivin及MRPl的mRNA水平表达下降，与对照组相比，差异具有统计学意义(尸

6、／DDP细胞，各蛋白表达情况与对照组相比差异无统计学意义(胗0．05)；转染、转染联合DDP后细胞中survivin、p-JNK、P—gP、MRPI蛋白的表达下降，与对照组相比，差异有统计学意义(P

7、联合顺铂具有协同作用，细胞对顺铂的敏感性增强。2．增敏顺铂对SGC7901／DDP作用的机制与mTOR／p70S6K／JNK通路下调P-gP、MRPl及GST以及mTOR／p70S6K／survivin通路下调survivn的表达有关。关键词SGC7901／DDP细胞；siRNA；DDP；JNK；survivin；mTOR4徐州医学院硕士学位论文SmallinterferenceRNAtargetingp70S6KenhancesthesensitivitytocisplatinofSGC790

8、1／DDPAbstractobjectiveToinvestigatetheeffectofmTOR／p70S6K。siRNAtransfectiontoenhancesthesensitivitytocisplatinofSGC7901／DDPandelucidatetheunderlyingmechanisms．MethodsInthisstudy,SGC7901／DDPcellswereculturedinRPMll640containing10％FBS，500ng／mlDDP,100U／