外源性FHIT基因对胃癌细胞株MGC803凋亡作用的影响

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1、浙江大学硕士学位论文外源性FHIT基因对胃癌细胞株MGC-803凋亡作用的影响姓名：孔梅申请学位级别：硕士专业：病理学和病理生理学指导教师：陈慰浙2003.5.1浙江大学硕士学位论文的外源性FHIT基因对胃癌细胞株MGC-803凋亡作用的研究浙江大学医学院2000级硕士研究生导师中文摘要病理和病理生理学孔梅陈慰浙副教授是消化道最常见的恶性肿瘤之一，已明确的胃癌的发病机制中，抑癌基因常表达占据重要一席．FHIT(fragilehistidinetriad)基因是1996年Otha等人在研究某家族性肾细胞癌时利用外显子捕获的方法发现的，并克隆了相应的eDNA。因包含有主要的脆性位点一FPu

2、3B及从属于组胺酸三联体(Histidinetriad(HIT))蛋白超家族，故命名。越来越多的研究发现FHIT基因在大量的原发性肿瘤及细胞株中存在异常，。厂该基因被认为是一个候选的抑癌基因．y，为了研究FHIT基因的抑癌机制，已有多人将外源性的FHIT基因转入胰腺癌，食道癌等细胞株中，发现FHIT基因可以诱导肿瘤细胞凋亡和细胞周期阻滞，但结果存在争议，而且目前尚无FHIT基因同胃癌细胞凋亡关系的研究报道。目的：探讨外源性FHIT基因的表达对胃癌细胞凋亡作用的影响．』实验方法：用脂质体将包含有外源性FHIT基因的重组真核表达质粒lpReC研V"-FHIT及作为对照的空真核表达质粒pRc

3、CM、J"转入FHIT蛋白表达缺失的人胃癌细胞株MGC一803中，G418筛选42天后，用Western—blot，免疫组化的方法验证了外源性FHIT蛋白的稳定表达，并检测了FHIT蛋白的细胞定位。然后用流式细胞仪，普通光镜及透射电镜对获得稳定FHIT蛋白表达的转染组细胞和空真核表达质粒转染组细胞及未转染的亲本细胞凋亡的状况进行了考察，另外还通过流式细胞仪检测了三组浙江大学硕士学位论文细胞生长周期的情况。实验结果：发现外源性FHIT基因转染组的胃癌细胞的凋亡率(32．3％)明显高于空质粒转染组和未转染组细胞(12．15％，6．175％)，形态学的观察也发现FHIT基因转染组的部分细胞中

4、出现了典型的凋亡变化：细胞体积缩小，细胞膜完整，胞浆浓缩，核染色质边集，核碎裂及凋亡小体等，而其他两组细胞未见明显的上述改变。另外，细胞周期也出现了明显的改变，GO／G1期的细胞百分比也从空载体组的49．5％增加到FHIT基因转染组的64．4％，即出现了明显的Go／m期阻滞。y结论：外源性FHIT基因能诱导胃癌细胞MGC-803凋亡及细胞周期阻滞，提示凋亡失控可能是FHIT基因表达异常的胃癌细胞株恶变的原因，细胞生长周期紊乱可能是FHIT基因表达异常的胃癌细胞株凋亡失控的一个原因。关键词FHIT基彳胃彩凋亡细胞月灏一转染抑痛赵蠡￥旌浙江大学硕士学位论文TransfectionofFra

5、gileHistidineTriadGeneInduceApoptosisinGastricCancerCellLineMGC_803DepartmentofPathologyCollegeofMedicalScience，ZhejiangUniversityPostgraduate：KONGMeiTlltor：CHENWei-zheAbstractStomachcancerisoneofthemostcomrflonhumancancers．Inactivationoftumorsuppressorgeneisamainreasoninducingcancerization．Frag

6、ilehistidinetriad(rHrrlgenelocatedinchromosomalregiO／13p142hasbeenclonedin1996byOthaeta1．Itspansnotonlythet(3：8)(p14．2；q24)translocationbreakpointfoundinfamilialrenalcellcarcinomabmalsothemostcorn／nonhumanfragilesite，FRA3B．AbnormalitiesintheFHITgeneitsexpressionhavebeenidentifiedinavarietyofhuma

7、ncancercelllinesandnfiTlorsFHITisregardedasatumorsuppressorgene．‘ResearcheshavedemonstratedthecorrelationbetweentheexpressionofFHITproteinandincidenceandprogressionofgastriccancerHowever,theseexperimentsrarelydemonstratedthe