遗传因素cyp2c9,vkorc1和cyp4f2对中国汉族人群华法林稳定剂量的影响

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1、遗传因素CYP2C9,VK0RC1和CYP4F2对中国汉族人群华法林稳定剂量的影响兰州大学第二医院检验屮心甘肃730030【摘要】目的确定CYP2C9、VKORCl、CYP4F2(rs2108622)和EPHXl(rs2292566)棊因多态性对屮国汉族人群华法林剂量的影响。方法选择连续三次国际标准化比值(INR)测量结果在治疗范围内服用华法林剂量稳定的患者181例，收集非遗传因素资料，华法林服用剂量及INR值，出血、血栓病史，用药史。抽血分离DNA并通过高分辨熔解技术(PCR-HRM)对CYP2C9,VKORC1,CYP4F2和EPHX1进行基因分型。多因素

2、回归分析來确定遗传和非遗传因素对华法林剂量的影响。结果除丫年龄，CYP2C9、VKORC1和CYP4F2的基因多态性是影响华法林稳定剂??量的显著预测变量，能够解释剂量差异的39.7%。VKORC1和CYP2C9基因型仍然是华法林剂量的主要预测变量，首次明确CYP4F2(rs2108622)基因型有助于确定屮国汉族人门华法林的稳定剂量。结论服用华法林的患者进行CYP2C9、CYP4F2和VKORC1基因多态性筛查，有助于确定华法林抗凝的初始剂量，减少频繁抽血检测INR的负担，可指导临床抗凝治疗及个体化用药。【关键词】华法林;CYP2C9；CYP4F2；VKOR

3、C1；EPHX1【屮图分类号】R492.5【文献标识码】A【文章编号】1001-5213(2016)09-0253-02华法林(warfarin)是临床上最常用的香豆素类口服抗凝药物，主要用于预防和治疗血栓性疾病。临床上使用的华法林是S-华法林和R-华法林的消旋体混合物。其屮，S-华法林(左旋华法林)是消旋华法林片剂的主要有效成分,其抗凝活性是R-华法林的3〜5倍，主要经CYP2C9酶催化代谢［1］。VKORC1蛋白是华法林作用靶点，华法林通过抑制维生素K环氧化物还原酶的活性从而阻碍维生素K依赖性凝血因子的活性来发挥抗凝效应。A前国内外关于CYP2C9和VKO

4、RC1基因对华法林剂量的影响己经得到证实［2］。近來，国外研宂发现丫很多影响华法林剂量的新候选基因［3］以及非遗传因素如年龄、性别、体重、体表面积、联合用药、饮食惯和合并症等。国内这方面的研究尚未成熟，因此本研究选择了最新研宄显示与华法林稳定剂量有明显相关性的CYP4F2基因、EPHX1基因，收集了患者的非遗传因素资料，探讨除了CYP2C9和VK0RC1基因外，CYP4F2和EPHX1及一些非遗传因素与中国汉族人群华法林剂量的关系以确定华法林抗凝的初始剂量，减少频繁抽血检测INR的负担，指导临床抗凝治疗及个体化用药。材料和方法1.研究对象选我院接受华法林治疗的

5、房颤、深部静脉血栓形成及心脏瓣膜置换术后的中国汉族患者247例。纳入标准：？服用华法林的吋间至少4个月。？服用剂量相冋的情况下连续三次国际标准化比值（INR）测量结果在治疗范围内。排除标准：？肝功能异常、癌症、先心病、肝脏疾病、出血性疾病。？接受以下可能与华法林相互作用的药物，如抗癫痫药物、抗结核药物、抗生素、氟康唑、巴比妥类药物和U服避孕药。？近4周内住院治疗过的患者。依据以上标准，247例患者中66例被剔除，最后选择的181例患者收集年龄，体重，身高，性别，吸烟，喝洒，肉、蔬菜、水果摄入量，每天华法林服用剂量及INR值。自愿参加研究的患者填写知情同意书。2

6、.研究方法1）基因组DNA的提取抽取枸橼酸钠抗凝静脉血2.7ml,在24小吋内提取基因组DNA,-40°C保存。使用北京百泰克生物公司的全血基因组DNA提取试剂盒，具体操作严格按照试剂说明书进行。为了保证试验的准确性和可靠性，提取的基因组DNA在一周内进行检测。2）基因分型使用Rotor—Gene6000焚光定量PCR仪（澳大利亚CorbettResearch公司）进行基因分型。PCR反应体系总体积15μL，其中Mg2+3.0mM;RealstartTaqDNAPolymerase0.75U；dNTPs0.8mM；EvaGreen0.5μL;正、反

7、引物均为0.5μM；基因组DNA10ng。PCR反成采用两步法45个循环扩增，预变性95°C3min,CYP2C9*2和CYP2C9*3:95°C5s，62°C15s；CYP4F2V433M、VKORC11173C/T和EPHX1:95°C5s,60°C15s,最后进行72°C2min延伸。PCR结束后进行95°C5s，50°C30s预杂交程序，然后从80°C开始熔解到90°C结束，温度变化速率为O.rC/sec。应用软件（RotorGene60001.7）进行实时数据检测和分析，依据熔解曲线和熔解峰进行基因分型，野生型和纯合突变型熔解峰为单峰，杂合突变

8、型为双峰。1.统计分析对于遗传变量，我