δ阿片受体激动剂对脓毒症大鼠肝线粒体呼吸功能的保护作用

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1、5阿片受体激动剂对脓毒症大鼠肝线粒体呼吸功能的保护作用［摘要］目的探讨S阿片受体激动剂DADLE（D-Ala2-D-Leu5-enkephalin）对脓毒症大鼠肝线粒体呼吸功能的保护作用。方法将60只健康雄性SD大鼠随机分为脓毒症组（SEP组，n=20）、假手术组（SO组，n=20）和DADLE组（n=20）。采用改良盲肠结扎穿孔方法建立脓毒症大鼠模型，假手术组除不结扎刺穿盲肠，DADLE组建立模型后按5mL/kg剂量腹腔注射浓度为0.5mg/mL的DALDE。制模8h后处死大鼠，取血清检测ALT和AST水平，取肝组织测定肝细胞线粒体呼吸功能及肝组织ATP、ADP、AMP

2、含量。结果DADLE组大鼠呼吸控制率（RCR）、磷/氧化（ADP/O）与SEP组比较显著升高（P［关键词］S阿片受体激动剂；脓毒症；盲肠结扎穿孔；线粒体［中图分类号］R%［文献标识码］A［文章编号］1673-9701（2015）16-0008-03［Abstract］ObjectiveTostudytheprotectiveeffectof8opioidreceptoragonistDADLE（D-Ala2-D-Leu5-enkephalin）onmitochondrialrespiratoryfunctioninaratmodelofsepsis.MethodsSixt

3、ySDratswererandomlydividedintoshamoperatedgroup(SO)，septicgroup(SEP)，andDADLEgroup(DADLE),eachof20cases.Sepsismodelwasproducedbycecalligationandpuncture(CLP).InSOgroup，theabdomenwasopenedwithoutanyothertreatment.InDADLEgroup,DADLE(0.5mg/mL)wasadministeratadoseof5mL/kgbyintra-peritonealinj

4、ectionafterCLP.Allratsweresacrificed8hoursafterCLP.ALTandASTinbloodweredetermined.Mitochondrialrespiratoryfunctionwasevaluatedbytheclarkoxygeneletrode.ThelevelsofATP,ADP，AMPweredeterminedbyhighperformanceliquidchromatography(HPLC).ResultsRCRandADP/OinDADLEgroupweremuchhigherthanthatinSEPg

5、roup(P1.3大鼠肝脏线粒体呼吸耗氧功能的测定RCR=ADP启动(加入ADP时)的态3呼吸速率/线粒体琥珀酸启动(ADP耗竭后)的态4呼吸速率。态3呼吸速率和态4呼吸速率采用Clark氧电极技术测定。反应体系总体积3mL，pH7.35〜7.45,包含：KCI0.01mol/L、MgCI25mmol/L、琥珀酸0.2mol/L、Tris-HCI0.01mol/L、蔗糖0.25mmol/L、KH2PO45mmol/L、ADP加入浓度为0.33mmol/L,线粒体蛋白浓度为1g/L，计算呼吸控制率（respiratorycontrolratio,RCR）、磷/氧化（ADP/

6、O）。1.4血清AST、ALT测定采用美国贝克曼奥林巴斯AU680全自动生化分析仪检测大鼠血清AST、ALT水平，所需试剂由该公司提供。1.5大鼠肝脏组织AMP、ADP、ATP含量测定称取30mg大鼠肝脏组织放入0.5mL冷却的10%HCIO4中，在冰浴下间断超声匀浆3min，并迅速制成20%的匀浆液。将制备的肝脏组织匀浆液在4°C下以8X103r/min离心min，留取上清液，置4°C冰箱保存待检。高效液相色谱仪（HPLC）系统购自美国Waters公司，包括：486型高效液相色谱仪，510型自动进样泵和Millenium数据处理软件系统。色谱条件预柱为Nova-pakC

7、18（3.9X150mm,3.5um）,流动相为NH4H2PO4缓冲液（浓度为0.1mol/L，pH值为5.3），流速为0.9mL/min，进样量为20uL，紫外线检测波长为254nm，灵敏度为0.01AUFS，柱温为室温。将AMP、ADP及ATP标准品（购自美国Sigma公司）分别配制成浓度梯度为0.0100mmol/L、0.0200mmol/L、0.0625mmol/L和0.1250mmol/L的标准液，取20PL标准液进样，计算并绘制出标准曲线。将检测样品获得的AMP、ADP及ATP峰面积与标准品峰面积相比，计算大鼠肝脏