麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）生产工艺的建立论文

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1、麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）生产工艺的建立论文.freell/瓶，置37℃培养。当人二倍体细胞长成单层时，换成细胞维持液，200ml/瓶，再加入毒种，毒种的感染剂量（MOI）为1：100。将感染病毒的细胞瓶置35℃培养，此方法称为单层法。当细胞病变达50%以上时，用400mlEarle’s液冲洗细胞面，去除小牛血清，加入疫苗液，200～500ml/瓶，置35℃培养。当细胞病变达90%以上时，收到4℃冷库。在4℃冷库释放病毒1周，按0.3%加入人血白蛋白作保护剂，抽样检定。检定合格后，加入蔗糖明胶稳定剂及长8号微量保护剂，采用适宜的冻干曲线冻干

2、。2.2同时法制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）单层人二倍体细胞2BS株按1：2传代，毒种的感染剂量（MOI）为1：1000。将细胞、病毒和培养液同时分装到10L瓶中（即同时法），2000ml/瓶，置35℃旋转培养，转瓶机转速为7～8r/h。当细胞病变达50%以上时，用3000mlEarle’s液冲洗细胞面，去除小牛血清，加入疫苗液，2000～5000ml/瓶，置35℃旋转培养。当细胞病变达90%以上时，收冷到4℃冷库转瓶机上。在4℃冷库释放病毒1周，按0.3%加入人血白蛋白作保护剂，抽样检定。检定合格后，加入蔗糖明胶稳定剂及长8号微量保护剂，

3、采用适宜的冻干曲线冻干。2.3无菌试验、鉴别试验、异常毒性试验、水分、物理检查按2005年版《中国药典》三部进行常规检定［2］。2.4牛血清白蛋白残留量检测采用放射免疫法。应不高于50ng/剂。2.5病毒滴度及热稳定性试验（37℃7d）采用微量细胞病变法。成品病毒滴度及37℃放置7天前后均不低于3.3LgCCID50/ml，37℃放置7天后病毒滴度下降不得超过1.0Lg。3结果3.1麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）成品检定3.1.1不同培养方法制备的麻疹减毒活疫苗基础滴度及热稳定性的比较单层法与同时法制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）的病毒滴度及

4、热稳定性均达到2005年版《中国药典》三部的要求，见表1。表1单层法与同时法制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）的病毒滴度及热稳定性（略）经统计学处理，t值分别为1.51、1.49，P均＞0.05，差异无显著性，因此，单层法与同时法制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）的病毒滴度及热稳定性无区别，两种方法均可以用于疫苗生产。3.1.2不同代次毒种制备的麻疹减毒活疫苗(人二倍体细胞)基础滴度及热稳定性分别以不同代次的毒种制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞），其基础滴度及热稳定性均符合2005年版《中国药典》三部的要求，结果见表2。表2不同代次毒种制备的麻

5、疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）基础滴度及热稳定性（略）9代、10代、11代毒种制备出的疫苗基础滴度及37℃稳定性均达到2005年版《中国药典》三部的要求，因此不同代次的毒种均可以制备疫苗。3.1.3不同培养方法制备的麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）牛血清白蛋白残留量检测单层法与同时法制备的麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞），牛血清白蛋白残留量比较，结果见表3。表3单层法与同时法制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）的牛血清白蛋白残留量（略）经统计学处理，t=19.51，P0.05，差异有显著性，因此同时法制备的疫苗的牛血清白蛋白残留量低于单层法制备的疫苗的

6、牛血清白蛋白残留量，表明应用同时法培养制备疫苗，可降低牛血清白蛋白残留量。3.1.4不同培养方法制备的麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）的无菌试验、鉴别试验、物理检查、水分、异常毒性试验不同培养方法制备的10批麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞），以上各项检定均符合2005年版《中国药典》三部的要求。由麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）成品检定结果可知，人二倍体细胞可以用于疫苗生产。3.1.5人二倍体细胞为基质制备麻疹减毒活疫苗与鸡胚细胞为基质制备麻疹减毒活疫苗收获率的比较人二倍体细胞为基质制备的麻疹减毒活疫苗收获率好于鸡胚细胞为基质制备的麻疹减毒活疫苗，结

7、果见表4。表4人二倍体细胞为基质与鸡胚细胞为基质制备麻疹减毒活疫苗的收获率（略）由表4可见，人二倍体细胞为基质制备麻疹减毒活疫苗的收获率高于鸡胚细胞为基质制备麻疹减毒活疫苗的收获率。综上所述，人二倍体细胞是制备麻疹减毒活疫苗的适宜基质，可以用于大量生产。4讨论人二倍体细胞制备麻疹减毒活疫苗收获率好于鸡胚细胞，人二倍体细胞比鸡胚细胞稳定，有利于疫苗质量的稳定，生产周期相应缩短。人二倍体细胞株是人源性细胞，具有广泛病毒敏感谱，是制备疫苗适宜的培养基质。二倍体细胞已被广泛用于疫苗生产，如生产水痘减毒活疫苗、风疹减毒活疫苗、甲肝减毒活疫苗等，已证明其是

8、安全、良好的细胞基质。目前国外有多家公司用二倍体细胞为基质生产麻疹减毒活疫苗，其疫苗的广泛使用，证明了用人二倍体细胞为基质生产的麻疹减毒活疫苗是安全、