麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）生产工艺的建立

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1、麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）生产工艺的建立【摘要】目的研制麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）。方法用麻疹病毒长-47株接种人二倍体细胞，经培养，收获病毒液并加适量稳定剂后冻干制成疫苗。疫苗按2005年版《中国药典》三部进行检定。结果麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）各项技术指标均符合2005年版《中国药典》三部的要求。结论人二倍体细胞为基质可以制备麻疹减毒活疫苗，疫苗质量稳定，收获率较高。【关键词】麻疹减毒活疫苗；人二倍体细胞；收获率麻疹是由麻疹病毒引起的主要罹及婴幼儿急性传染病。在我国麻疹减毒活疫苗应用已有近40年的历史，制备疫苗均以鸡胚细胞为基质，作为异源细胞，具

2、有携带禽病毒的可能，而人二倍体细胞为人源细胞〔1〕，在国外早已用来生产麻疹减毒活疫苗。人二倍体细胞（2BS株）现已广泛应用于疫苗生产，如甲肝减毒活疫苗、水痘减毒活疫苗等，已证明其具有安全性。我们用人二倍体细胞为基质制备出符合2005年版《中国药典》三部要求的麻疹减毒活疫苗，本文就此做如下报告。　　1材料　　1.1细胞　　生产用细胞为人二倍体细胞2BS株，用于生产的细胞世代限定在43代以内。　　1.2毒种　　鸡胚细胞为培养基质制备的麻疹减毒活疫苗毒种长47株27代适应于人二倍体细胞，33℃和35℃培养，收获制成，经检定后用于生产，并已有多个代次毒种制备疫苗，证明此

3、毒种具有良好的传代稳定性。　　1.3培养液及维持液　　MEM为基础液，加入适当比例的灭能小牛血清，碳酸氢钠调pH值。　　1.4疫苗液　　199液，pH值为7.4～7.5。　　2方法　　2.1单层法制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）　　单层人二倍体细胞2BS株按1：2～1：4传代，接种2L克氏瓶，加入细胞培养液，180ml/瓶，置37℃培养。当人二倍体细胞长成单层时，换成细胞维持液，200ml/瓶，再加入毒种，毒种的感染剂量（MOI）为1：100。将感染病毒的细胞瓶置35℃培养，此方法称为单层法。当细胞病变达50%以上时，用400mlEarle’s液冲洗细胞面，去

4、除小牛血清，加入疫苗液，200～500ml/瓶，置35℃培养。当细胞病变达90%以上时，收到4℃冷库。在4℃冷库释放病毒1周，按0.3%加入人血白蛋白作保护剂，抽样检定。检定合格后，加入蔗糖明胶稳定剂及长8号微量保护剂，采用适宜的冻干曲线冻干。　　2.2同时法制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）　　单层人二倍体细胞2BS株按1：2传代，毒种的感染剂量（MOI）为1：1000。将细胞、病毒和培养液同时分装到10L瓶中（即同时法），2000ml/瓶，置35℃旋转培养，转瓶机转速为7～8r/h。当细胞病变达50%以上时，用3000mlEarle’s液冲洗细胞面，去除小牛

5、血清，加入疫苗液，2000～5000ml/瓶，置35℃旋转培养。当细胞病变达90%以上时，收冷到4℃冷库转瓶机上。在4℃冷库释放病毒1周，按0.3%加入人血白蛋白作保护剂，抽样检定。检定合格后，加入蔗糖明胶稳定剂及长8号微量保护剂，采用适宜的冻干曲线冻干。　　2.3无菌试验、鉴别试验、异常毒性试验、水分、物理检查　　按2005年版《中国药典》三部进行常规检定〔2〕。　　2.4牛血清白蛋白残留量检测　　采用放射免疫法。应不高于50ng/剂。　　2.5病毒滴度及热稳定性试验（37℃7d）　　采用微量细胞病变法。成品病毒滴度及37℃放置7天前后均不低于3.3LgCCI

6、D50/ml，37℃放置7天后病毒滴度下降不得超过1.0Lg。　　3结果　　3.1麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）成品检定　　3.1.1不同培养方法制备的麻疹减毒活疫苗基础滴度及热稳定性的比较　　单层法与同时法制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）的病毒滴度及热稳定性均达到2005年版《中国药典》三部的要求，见表1。表1单层法与同时法制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）的病毒滴度及热稳定性（略）经统计学处理，t值分别为1.51、1.49，P均＞0.05，差异无显著性，因此，单层法与同时法制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）的病毒滴度及热稳定性无区别，两种方法均可以用于疫苗

7、生产。　　3.1.2不同代次毒种制备的麻疹减毒活疫苗(人二倍体细胞)基础滴度及热稳定性　　分别以不同代次的毒种制备麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞），其基础滴度及热稳定性均符合2005年版《中国药典》三部的要求，结果见表2。表2不同代次毒种制备的麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）基础滴度及热稳定性（略）9代、10代、11代毒种制备出的疫苗基础滴度及37℃稳定性均达到2005年版《中国药典》三部的要求，因此不同代次的毒种均可以制备疫苗。　　3.1.3不同培养方法制备的麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）牛血清白蛋白残留量检测　　单层法与同时法制备的麻疹减毒活疫苗（人二倍体细胞）

8、，牛血清白蛋白残留量比较