天山堇菜中总黄酮和多糖的微波提取与含量测定

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1、天山堇菜中总黄酮和多糖的微波提取与含量测定作者：吴建芳，李炳奇，薛梅，韦文珍【摘要】　　目的从天山堇菜中提取总黄酮和多糖，并测定其含量。方法运用微波技术提取天山堇菜总黄酮和多糖，用比色法测定总黄酮和多糖含量。结果测得天山堇菜中总黄酮含量为1.465％，平均回收率为98.05％，RSD为1.74％(n=5)；多糖含量为8.478％，平均回收率为99.86％，RSD为1.58％(n=5)。结论运用微波技术从天山堇菜中提取总黄酮和多糖，反应速度快，效率高。【关键词】微波技术；天山堇菜；总黄酮；多糖；提取　　Abstract：ObjectiveT

2、oextractanddeterminethetotalflavonoidsandpolysaccharidesinViolatianshanicaMaxim.MethodsTotalflavonoidsandpolysaccharidesinViolatianshanicaMaximicroinedbycolorimetry.ResultsTotalflavonoidsinViolatianshanicaMaximforthefirsttime.Thereactionspeedisfastandtheresultissatisfacto

3、ry.　　Key;Totalflavonoids;Polysaccharide;Extraction;Determination天山堇菜，维药名为比那夫西(HerbaViolaeTianshanicae)是堇菜Violaceae植物天山堇菜ViolatianshanicaMaxim的干燥全草。其气微，味微苦辛、性凉，清热解毒，具有调理、软化、发汗的作用［1］。天山堇菜主要分布于新疆南疆各山区，前苏联亦有分布。其药用部位是全草，全草经预实验检出含挥发油、黄酮类、生物碱、氨基酸、液质皂苷、鞣质等［2］，天山堇菜作为维吾尔族药在新疆民间被广泛应

4、用，但有关其化学成分多糖和黄酮的研究，至今未见报道。微波法原理是利用磁控管所产生的24.5亿次/s超高频率的快速震动，使材料内分子间相互碰撞、挤压，利于有效成分的浸出。与传统的中药煎煮法相比，微波加热法可以得到更高的产物提取率，而且整个过程大大缩短提取时间，杂质含量显著减少［3］。我们运用微波技术联合提取天山堇菜中总黄酮和多糖，以芦丁为对照品测定天山堇菜中总黄酮含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成配合物在可见光区能获得稳定的特征吸收峰；运用微波技术水提醇沉法制得天山堇菜粗多糖，并采用酚-硫酸比色法对其多糖进行含

5、量测定，以期为天山堇菜总黄酮和多糖的研究和开发利用奠定基础。　　1材料与设备对照品芦丁，购自中国药品生物制品检定所；其余试剂均为分析纯；天山堇菜，购自新疆和田市维吾尔医院。722型分光光度计，日本岛津；MCL-3型连续微波反应器，四川大学无线电系。　　2方法与结果　　2.1样品溶液制备　　取天山堇菜约2g，精密称定，用滤纸包好，分置于索氏提取器中，用石油醚（60～90℃）水浴回流脱脂2次（2h/次），弃去石油醚提取液。天山堇菜挥干石油醚后，置1000ml烧瓶中，将此烧瓶放入MCL-3型连续微波反应器中，用80%乙醇回流提取两次，调整功率5

6、60，500，400，350CL-3型连续微波反应器中，用80%乙醇回流提取20min，调整功率560，500，400，350CL-3型连续微波反应器中，继续以水回流提取2次（20min/次），调整功率560，500，400，350l，即为测多糖的天山堇菜样品液。　　2.2总黄酮含量的测定　　2.2.1标准曲线制备　　精密称取芦丁对照品10mg，置25ml量瓶中，加80%乙醇溶解，定容，精密吸取0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml，分置于10ml量瓶中，加5%亚硝酸钠0.3ml，放置6min，再加10%硝酸铝0.3ml，放置

7、6min，加4%氢氧化钠4ml，加水至刻度，摇匀。进行全波长扫描在510nm处均有最大吸收。以510nm处测得的吸收度A对浓度C回归，得回归方程：A=11.225C+0.0027，r=0.99913，在8～40μg/ml的范围内，浓度与吸收度有良好的线性关系。　　2.2.2样品测定　　分别将测总黄酮的各样品液定量稀释后，再精密吸取各稀释液适量于10ml量瓶中，照标准曲线制定项下方法操作，测定吸收度，由回归方程求出稀释液中总黄酮浓度，然后计算百分含量。结果见表1。　　2.2.3精密度实验分别量取黄酮样品液适量按“2.2.1”项下的操作，对同

8、一样品液连续测定5次。结果RSD＝1.02%（n=5），表明本实验精密性良好。　　2.2.4重复性实验　　精密称取同批天山堇菜样品共5份，按“2.1”项下方法操作，制备黄酮样品济液5份，进行含