高效液相色谱法测定氯法拉滨注射液中氯法拉滨的含量论文

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1、高效液相色谱法测定氯法拉滨注射液中氯法拉滨的含量论文王娟，张蓉，赵艳艳，卢来春【摘要】目的：建立高效液相色谱法测定氯法拉滨注射液中主药氯法拉滨的含量。方法：采用ShimpackVPODS（5μm，4.6mm×150mm）色谱柱，流动相为乙腈乙酸铵溶液（取乙酸铵0.31g，加水溶解并稀释至1000mL，再加甲酸1.0mL）（10∶90）.freelL/min，进样量20μL，检测波长262nm。结果：氯法拉滨在进样量0.4～242.5μg/mL范围内线性关系良好，回归方程为A=23156C+123

2、78（r=0.9999，n=5），平均加样回收率为99.97%，RSD为0.40%。结论：本方法快速、简便、结果准确，可用于控制该制剂的质量。【关键词】高效液相色谱法；氯法拉滨；含量测定［Abstract］Objective:Toestablishahighperformanceliquidchromatograph(HPLC)methodtoassaytheconcentrationofclofarabineinclofarabineinjection.Methods:ShimpackVPODS

3、(5μm,4.6mm×150mm)columnandamobilephaseofacetonitrileammoniumacetatesolution(mol/Lammoniumacetateand0.1%offormicacid)(10∶90)L/min.Thedetection.Results:ThereLandtheregressionequationethodissimple,accurateandabletocontrolthequalityofthepreparation.［Keyanc

4、eliquidchromatograph;Clofarabine;Determination氯法拉滨由美国Genzyme公司研发，并由美国FDA通过快速审批程序于2005年1月11日上市，作为近十年来首个获准专门用于治疗儿童白血病的新药，主要用于治疗儿童难治性或复发性急性淋巴细胞性白血病（ALL），患儿此前至少已接受过两种疗法治疗而无效者［14］。目前，氯法拉滨国内无上市产品，为更好地控制本品质量，本实验建立了氯法拉滨的含量测定方法，并经方法学考察，认为本法简便快捷，结果准确，可用于氯法拉滨注射液的

5、质量控制。1仪器与试药岛津LC10ATvp高效液相色谱仪，SPD10A紫外可见光检测器；氯法拉滨对照品（第三军医大学新桥医院药学部合成并精制，纯度为99.85%），氯法拉滨注射液（第三军医大学新桥医院药学部制备；规格：20mL∶20mg；批号080505、080506、080507）；乙腈为色谱纯，乙酸铵、甲酸为分析纯，水为纯化水。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱：ShimpackVPODS（C18，5μm，4.6mm×150mm）；流动相：乙腈乙酸铵溶液（取乙酸铵0.31g，加水溶解并稀释

6、至1000mL后，再加甲酸1.0mL）（10∶90）；流速1.0mL/min；检测波长262nm；进样量20μL。理论板数按氯法拉滨计算为8966，拖尾因子为1.136。此条件下，氯法拉滨主峰与各杂质峰达到基线分离。2.2对照品储备液的配制精密称取氯法拉滨对照品121.25mg，置100mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成约含氯法拉滨1.2125mg/mL的对照品贮备液，备用。2.3供试品溶液的配制取氯法拉滨注射液20mL，置100mL容量瓶中，加水稀释定容，制成每毫升含氯法拉滨200μg的溶

7、液，摇匀，备用。2.4阴性对照溶液的制备氯法拉滨注射液其主要辅料是氯化钠。取氯化钠适量，按处方比例加水稀释成0.9%的溶液，滤过，备用。2.5阴性对照试验按照上述色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，结果见图1。阴性对照溶液中的组分不干扰供试品溶液中氯法拉滨的测定。氯法拉滨的保留时间约为10.1min。2.6标准曲线精密量取对照品贮备液，分别稀释制成含氯法拉滨0.4、1.94、9.7、48.5、242.5μg/mL的溶液，照上述色谱条件，分别精密吸取上述溶液

8、20μL进样，记录色谱图，以峰面积A为纵坐标，对照品溶液浓度C（μg/mL）为横坐标，面积归一法得氯法拉滨的线性回归方程为：A=23156C+12378（r=0.9999，n=5）。结果表明氯法拉滨浓度在（0.4～242.5）μg/mL范围内溶液浓度与峰面积线性关系良好。2.7精密度试验精密移取对照品储备液20mL，置100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，得浓度为242.5μg/mL对照品溶液，取上述溶液20μL，一天内重复进样6次，测得各峰面积分别为55