高效液相色谱法测定氢氯噻嗪原料的含量论文

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1、高效液相色谱法测定氢氯噻嗪原料的含量论文【摘要】目的：建立氢氯噻嗪原料药的含量测定方法。方法：采用C18柱（250mm×4.6mm，5μm），以0.1mol/L磷酸二氢钠乙腈（9∶1）（用磷酸调节pH值至3.0）为流动相，检测波长271nm，流速1.5mL/min，柱温30℃。结果：氢氯噻嗪浓度在0.004～0.20mg/mL浓度范围内与峰面积线性关系良好（r=0.9999，n=7），加样回收率99.82%.freelinationofHydrochlorothiazideZENGTan,ZHOULin(Chon

2、gqingInstituteforDrugControl,.freelethodforthedeterminationofHydrochlorothiazide.Methods:ThechromatographicseparationedonaC18column(250mm×4.6mm,5μm)heldintheovenof30℃.Themobilephaseconsistedofadegassedmixtureof0.1mol/Lmonobasicsodiumphosphateandacetonitrile(9:

3、1),adjustedL/minandUVdetection.Results:Thecalibrationoftheresponsesofhydrochlorothiaziderangedfrom0.004to0.20mg/mLethodprovestobequick,simpleandsensitive.Itcouldbeappliedintothequalitycontrolofhydrochlorothiazide.［Keyanceliquidchromatography;Determinationofcon

4、tent氢氯噻嗪是一种临床应用十分普遍的药物，主要抑制髓袢升支皮质部对Na+和Cl的重吸收，使肾脏对氯化钠的排泄增加而产生利尿作用，常与其他降压药物配合作用治疗高血压。原质量标准采用甲醇钠滴定法测定其含量［1］，毒性较大且操作不便，方法精密度差。本研究参考国内外氢氯噻嗪原料的质量标准［2］，建立了氢氯噻嗪含量测定的HPLC方法。1仪器和试药Agilent1100高效液相色谱仪（配有紫外检测器及二极管阵列检测器），AE240型电子天平（瑞士梅特勒）。磷酸二氢钠（分析纯，重庆北碚化学试剂厂）、乙腈（色谱纯，山东禹王实

5、业有限公司化工分公司）、水（二次蒸馏水）、氢氯噻嗪对照品（中国药品生物制品检定所，批号为100309200702，含量99.8%）。2方法与结果2.1测定波长选择取氢氯噻嗪对照品20mg，置50mL量瓶中，用甲醇乙腈（1∶1）5mL溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取此溶液5mL置50mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，在200～400nm波长处扫描，扫描结果见图1。由图可见，最大吸收波长为224nm、271nm。224nm波长靠近末端吸收且杂质在此波长处吸收较大，故选择271nm做为检测波长。图1氢氯噻嗪紫

6、外扫描图谱（略）2.2色谱条件及系统适用性实验色谱柱：pHenomenexC18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：0.1mol/L磷酸二氢钠溶液乙腈（9∶1）（用磷酸调节pH值至3.0）；测定波长：271nm；流速：1.5mL/min；柱温：30℃；进样量：10μL。在此色谱条件下，氢氯噻嗪峰的保留时间为11.217min，理论塔板数为19054，氢氯噻嗪峰与最近杂质峰的分离度为13.58。色谱图见图2。图2氢氯噻嗪原料色谱图（略）2.3线性范围精密称取氢氯噻嗪对照品20.00mg，置50mL量瓶中，

7、用甲醇乙腈（1∶1）5mL溶解并用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备液。分别量取对照品储备液适量，用流动相稀释制成每毫升含0.004、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.20mg的溶液。照上述色谱条件，分别各取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度为x，峰面积为y，计算回归方程为：y=1.5553+24769.1x，r=0.9999（n=7），表明氢氯噻嗪在0.004～0.20mg/mL浓度范围内与峰面积的线性关系良好。2.4检测限与定量限取浓度为0.1004μg/mL的氢氯噻嗪对照品溶

8、液进样10μL，氢氯噻嗪峰的信噪比为3.7。以S/N为3和10分别计算氢氯噻嗪的检测限和定量限，分别为0.0814μg、0.269μg。2.5专属性试验称取氢氯噻嗪约20mg，分别经高温破坏（置坩锅中，电炉上加热至供试品熔融变色）、酸破坏（加0.1mol/L盐酸溶液5mL，置水浴中煮沸1h，放冷，调节pH值至中性）、碱破坏（加0.1mol/L氢氧化钠溶液5m