高效液相色谱法测定半边旗中木犀草素的含量论文

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1、高效液相色谱法测定半边旗中木犀草素的含量论文吕应年吴科锋,邓亦峰,梁念慈【关键词】高效液相色谱；,,半边旗；,,黄酮；,,木犀草素摘要：目的建立草药半边旗中木犀草素含量的准确测定方法，并测定不同采收期半边旗中木犀草素的含量。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为DiamonsilC18，流动相为甲醇水梯度洗脱，流速0.2mlmin1，检测波长为283nm，柱温度35℃。结果木犀草素进样量在0.062~0.62μg范围内线性关系良好（R2=0.9987），平均回收率为99.5％(RSD=1.98%)。结论该方法操作简便.freelethod

2、forcontentdeterminationofluteolinfromPSL.MethodsTheseparationedonaDiamonsilC18column,themobilephaseixtureofmethanol(B)andlmin1,theultraviolet,andthecolumntemperatureaintainedat35℃.ResultsThecalibrationcurveshoethodissimple,.freelipinnata;Flavonoid;Luteolin半边旗Psterissem

3、ipinnataL.又名半边蕨、半边莲、单边旗，系凤尾蕨科植物，是一种南方常用生药，始载于《岭南采药录》，称半边旗。有止血、生肌、解毒、消肿之功效，民间用于吐血、外伤出血、发背、疔疮、跌打损伤、目赤肿痛等［1］。现代研究表明，半边旗中含有挥发油、萜类、黄酮、皂苷等多种物质［2］。有关半边旗的药效成分研究主要集中在萜类化合物［3，4］。关于半边旗中黄酮类物质药学研究尚未见报道。本课题组曾用分光光度法测定半边旗黄酮的含量［5］，但该法主要用于植物提取物总黄酮的含量测定，不适合于对黄酮单体的分析。本文采用高效液相色谱对半边旗的黄酮单体木犀

4、草素进行研究，建立了半边旗中木犀草素含量的测定方法，并测定不同采取收期半边旗的黄酮单体木犀草素进行研究，并测定不同采收期半边旗中木犀草素的含量，为植物半边旗的广泛开发利用奠定基础。1仪器与试剂1.1仪器岛津LC10A高效液相色谱仪（LC10ATVP泵，SCL10AVP控制器，SPD10AVP紫外检测器，CTO10AVP柱温箱），梅特勒AE240型分析天平。1.2木犀草素对照品购于天津尖峰天然产物研究开发公司。1.3半边旗草药采收于广东湛江郊区，经成都中医药大学苟占平博士鉴定为半边旗全草。2方法和结果2.1色谱条件色谱柱Diamons

5、ilC18(150mm×4.6mm，5μｍ)；紫外检测波长283nm；流动相为甲醇水溶液，0%~100％梯度洗脱；流速0.2mlmin1；柱温为35℃。2.2溶液的制备2.2.1对照品溶液的配制精密称取木犀草素对照品0.00124g，置10ml容量瓶中，加甲醇超声溶解，定容至刻度，摇匀，即得浓度为0.124gL1的木犀草素对照品储备液。精密吸取储备液0.1，0.3，0.5，0.7，1.0ml，分别加入甲醇定容至1.0ml，摇匀，即得含木犀草素对照品溶液。2.2.2供试品溶液的配制按文献［5］的方法制备半边旗提取物，称取半边旗提取物约

6、5g，先后加氯仿、醋酸乙酯索氏提取至无色，蒸干醋酸乙酯提取液得半边旗黄酮，精密称取半边旗黄酮约100mg，置100ml容量瓶中，加甲醇超声使溶解，定容至刻度，摇匀。经0.45μm微孔滤膜过滤，即得。2.3系统适应性及专属性实验分别取对照品溶液、供试品溶液各5μl进样色谱仪，记录色谱图如图1。在上述色谱条件下木犀草素出峰时间28min，供试品在木犀草素峰相应位置有一显著峰。实验结果表明该方法能使半边旗黄酮较好分离，色谱系统的适应性及专属性良好。a木犀草素标准品b半边旗黄酮供试品图1色谱图（略）2.4线性关系的考察分别精密量取上述对照品

7、溶液各5μl进样，以色谱峰面积（Y）对质量（X）进行回归，木犀草素的线性回归方程为Y=408058X，R2=0.9987，线性范围为0.062～0.62μg。2.5精密度实验取对照品储备液5μl，连续进样6次，测得木犀草素峰面积RSD均为0.84%，表明仪器进样精密度良好。2.6稳定性实验取供试样品溶液5μl，分别在0，3，6，12，16h进样，测定木犀草素的峰面积RSD为1.34%，表明样品溶液在16h内稳定。2.7重复性实验取同一批半边旗草药，按供试品制备方法配制6份，分别进样5μl，测定木犀草素的含量RSD为1.64%，表明该

8、方法的重现性较好。2.8加样回收率实验取同一供试品5份，分别加入木犀草素对照品，按供试品溶液制备方法制备样品，进样5μl，计算得回收率分别为99.5%，RSD1.98%。结果见表1。2.9样品含量测定取不同采收期的半边旗全草，按供试品