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1、HPLC测定地椒草中木犀草素含量贵州安顺职院,贵州安顺561000【摘要】:目的:建立地椒草中木犀草素含量测定的HPLC方法;方法:DiamonsilC18(5μm,250×4.6i.d.mm,迪马公司);流动相:甲醇-水-磷酸(60�40�0.4);流速:1ml/min;温度:35℃;检测波长为350nm;结果:木犀草素在100.12~800.96ng范围内与峰面积呈良好线性关系,r=0.9999,地椒草药材平均回收率为97.95%,RSD为0.97%;结论:HPLC测定地椒草中木犀草素结果准确可靠,快速,灵敏,重现性好｡【关键词】:地椒草;木犀草素;高效液相色谱法;含量测定
2、【中图分类号】R927.2【文献标识码】B【文章编号】1007-8517(2009)03(上)0029-02地椒草Thymus6vulgaris[1]为唇形科地椒草属植物,主要分布于西藏､青海等省,为藏族和蒙古族等民间传统常用草药｡具有消炎止痛,活血化淤等功效,用于治疗跌打损伤,筋骨疼痛,骨质松炎等症[2,3]｡主要含有黄酮类[4]､环烯醚萜类[5]成分｡目前尚未见有关地椒草中指标性成分木犀草素含量测定方法的报道｡本文建立了地椒草中木犀草素的HPLC含量测定方法及测定了不同批次药材中其含量｡1仪
3、器和材料高效液相色谱仪:LC-10ATvp泵(美国),SPD-10Avp紫外检测器(美国),CTO-10Asvp柱温箱(美国);ShimadzuLibrorAEL40SM(十万分之一)天平(日本岛津所)｡色谱甲醇(天津市科密欧化学试开发中心);水(重蒸馏,临用前制备);木犀草素对照品(中国生物制品鉴定所,批号:111520-200201)样品三批(批号:20040101､20040102､20040103)2方法与结果色谱条件色谱柱:DiamonsilC18(5μm,250×4.6i.d.mm,迪马公司);流动相:甲醇-水-磷酸(60∶40∶0.4)
4、;流速:1ml/min;温度:35℃;检测波长为350nm｡在此条件下,药材中木犀草素与其他成分能很好地分离｡以工作站中的色谱峰纯度分析和光谱匹配对照对所得色谱图进行分析｡结果地椒草药材中木犀草素峰的纯度角(PurityAngle)为0.846,阈值(Threshold)为1.914;光谱匹配角(MatchAngle)为0.384,阈值(MatchThreshold)为1.838,在210~400nm范围内与对照品有很好的光谱匹配｡对照品溶液的配制6精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的木犀草素对照品适量,加甲醇制成每1ml含木犀草素40μg
5、的溶液,即得｡线性范围的考察精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的木犀草素对照品10.12mg置100ml棕色容量瓶中,加甲醇使溶解并稀释至刻度,摇匀,制成每1ml含木犀草素100.12μg的对照品储备液;精密吸取该液2.5､5､10､15､20ml,置25ml棕色容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,制成每1ml含木犀草素10.012､20.024､40.048､60.072､80.096μg的系列对照品溶液,分别精密吸取上述系列对照品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,按上
6、述色谱条件测定峰面积,记录色谱图,测定结果见表1,并以对照品进样量X(ng)为横坐标,峰面积值Y(mv.s)为纵坐标,绘制标准曲线,结果表明,木犀草素在100.12~800.96ng范围内线性关系良好｡精密度试验精密吸取对照品溶液10μl,重复进样5次,测定木犀草素峰面积积分值,求出相对标准偏差,结果表明,木犀草素进样精密度良好,RSD=0.65%｡2.1重复性试验取地椒草6药材(批号:20040103)粉末各2g,共5份,按地椒草药材供试液的制备方法制备供试液｡精密吸取供试品溶液各10μl,注入高效液相色谱仪,测定木犀草素峰面积积分值,计算含量,求
7、相对标准偏差;结果表明此方法测定木犀草素的重现性良好,RSD=1.09%｡2.2稳定性试验取地椒草药材(批号:20040103)粉末2g,按地椒草药材供试液的制备方法制备供试液,在室温下按表4规定时间进样,测定木犀草素峰面积值,求相对标准偏差;结果表明,木犀草素在24小时内基本稳定,RSD=0.84%｡2.3回收率试验采用加样回收试验,取已知含量的重现性试验的同一批样品(批号:20
