西南地区不同居群葎草中总黄酮与木犀草素的含量分析

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1、西南地区不同居群葎草中总黄酮与木犀草素的含量分析【摘要】目的考察西南地区不同居群葎草中总黄酮和木犀草素的含量。方法以芦丁为对照品，采用分光光度法测定葎草中总黄酮的含量;采用反相高效液相色谱法测定葎草中木犀草素的含量。结果葎草中总黄酮与木犀草素的含量在不同居群间差异显著，以四川和重庆产含量较高。结论该方法适用于葎草的质量分析，可以为葎草资源开发提供参考。【关键词】葎草;居群;总黄酮;木犀草素　葎草Humulusscandens(Lour.)Merr.又名拉拉秧、拉拉藤等，为桑科葎草属植物[1]，始载于《唐

2、本草》，名为葛葎蔓，全草具有清热解毒、利尿消肿等功效，民间常用来治疗肺结核潮热、胃肠炎、痢疾、感冒发热、膀胱炎、肾盂肾炎、泌尿系结石、痔疮等症，外用治疗痈疥肿毒、湿疹、虫蛇咬伤等症[2]。现代研究表明葎草化学成分复杂，具有广泛的生物活性，且已从中分离得到木犀草素和牡荆素多种黄酮类化合物。葎草资源丰富，常作为农业杂草被除去，具有较大的开发前景。我们分析比较了西南地区不同居群葎草中总黄酮与木犀草素的含量，研究葎草的质量控制方法以及不同居群间葎草有效成分的含量变异，为促进葎草资源的开发利用奠定基础。　　1仪器

3、与试药　　1.1仪器岛津LC-2010A高效液相色谱仪，CLASS-VP色谱工作站，龙尼柯UV-2102PC紫外可见分光光度计，Millipore溶剂过滤系统，METIERTOLEDOAG204万分之一电子分析天平。　　1.2试药芦丁、木犀草素对照品由中国药品生物制品检定所提供，甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其余所用试剂均为分析纯。实验样品经本校中药教研室王刚副教授鉴定为葎草。　　2方法和结果　　2.1木犀草素的含量测定[3,4]　　2.1.1高效液相色谱条件色谱柱为C18柱(5μm，250mm×4.6mm

4、);流动相为甲醇-2%醋酸(50∶50);检测波长350nm;流速1.0ml·min-1;柱温为室温;进样量20μl，理论塔板数按木犀草素计不低于4000，高效液相色谱图见图1。A-对照品B-葎草a-木犀草素图1样品高效液相色谱图　　2.1.2对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的木犀草素6.5mg，置50ml容量瓶中，加80%乙醇溶解并定容，摇匀，即得对照品储备溶液。　　2.1.3样品溶液的制备将不同居群葎草样品粉碎，过筛(40目)，精密称取葎草细粉4g，置100ml圆底烧瓶中，加80%乙醇50ml，加

5、热回流2h，过滤，滤液蒸干后，加2%H2SO450ml，酸水解1h，放冷后，分别用40，40，20ml的醋酸乙酯萃取3次，合并萃取液，回收醋酸乙酯至浸膏。浸膏用80%乙醇50ml溶解，过滤，取续滤液10ml作为供试品溶液。　　2.1.4线性关系考察精密量取木犀草素对照品溶液适量，加80%乙醇制成系列标准溶液，进样测定。以色谱峰面积A对进样量M(μg)进行线性回归，结果表明木犀草素在进样量范围内线性关系良好，线性范围为0.26～2.6μg，回归方程为A=3888216M-538639，回归系数0.9993

6、。　　2.1.5精密度实验在上述色谱条件下，精密吸取木犀草素照品溶液，进样20μl，重复进样6次，测得峰面积的RSD为1.22%，表明精密度良好。　　2.1.6稳定性实验在上述色谱条件下，精密吸取同一供试品溶液20μl，分别间隔2h进样，重复5次，并测定峰面积，计算RSD为1.83%。　　2.1.7重复性实验对同一批样品按样品溶液的制备方法平行制备6份，分别进样20μl，依照样品测定方法测定，并计算RSD为2.17%。　　2.1.8加样回收率实验取已知木犀草素含量的葎草样品细粉9份，每份约0.2g，精密

7、称定，分别精密加入高、中、低3个质量浓度的木犀草素对照品溶液适量，按照“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，同一质量浓度制备3份，并在上述色谱条件下测定，结果平均加样回收率为98.9%，RSD为1.45%。　　2.1.9样品测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，按上述色谱条件进行测定，以外标法计算样品中木犀草素的含量。结果见表1。　　2.2总黄酮的含量测定[5]　　2.2.1芦丁对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的无水芦丁8.1mg，置于50ml容量瓶中，加80%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀即

8、得。　　2.2.2供试品溶液的制备将不同居群葎草样品粉碎，过筛(40目)，精密称取葎草细粉0.8g，置索氏提取器中，加石油醚100ml，加热回流至提取液无色，弃去石油醚提取液。待药渣挥干后，置烘箱中60℃干燥1h，然后转移至具塞锥形瓶中，精密加入80%乙醇100ml，密塞，称定重量，超声60min，放冷再称定重量，用80%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。　　2.2.3测定波长的选择取芦丁对照品溶液和供试品溶液各2ml